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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 求助关于番茄TY3标记(P6-25)PCR检测所遇到的奇怪问题!!! 已有2人参与

我们实验室用番茄TY3标记(P6-25)对番茄育种材料进行抗性检测,一直出现问题,现将问题描述如下:
      我们进行番茄样品的大量检测,刚开始的时候这对引物的效果还不错,但之后绝大多数DNA样品均出现整个泳道弥散的状况(明天我再上图,现在手头没有),这里提取DNA用的都是试剂盒,我们怀疑过DNA质量的问题,就用CTAB以及天根的试剂盒,包括引物换过生工和英俊的,都没有任何改善。
      在此之后,我们带着我们的引物、DNA去外地农科院找原因,描述一下我做的主要实验,也是很困惑的地方:
       1 首先,我们的样品在农科院提的DNA分别用我们的引物和农科院的引物进行PCR,结果我们的引物仍然出现泳道弥散的状况,而他们的引物P出很清晰的条带。
      2  至此,我觉得问题找到了,就带着农科院的引物、混合酶、DNA回到我们实验室,做重复,结果仍然泳道弥散。
       3 我们也怀疑过我们实验室的PCR仪、水和TAE电泳系统的问题,用哇哈哈纯净水进过高温灭菌更换了水和整个TAE电泳液,结果仍然重复不出来。
      4 我们带着做PCR的所有东西到当地一所大学,用他们的PCR仪和电泳系统,依旧重复不出来,带着一部分PCR产物回我们实验室跑电泳,结果依旧。
     描述不清的地方请再问我,非常感谢!      
我们似乎排除了所有的因素,已经找不到头绪了,还望高手不吝赐教!感激不尽!
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太阳出来,星星要走。
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
难不成是EP管?枪头?枪?有问题?70%酒精把大小枪的下端细孔内清理清理看看?
2楼2015-01-17 18:28:18
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
昺昺(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-17 19:49:44
昺昺: 金币+5, 有帮助 2015-01-17 22:01:40
另外,PCR仪放样品的板子和下端的加热板有没有错位?实验室以前有个人无意中把板子和加热板错开了一点点但未发觉,结果后面的人每次做PCR,EP管都插错位了,放在了散热孔上,不是加热孔上,PCR结果也是弥散一片,当时到处找原因,最后才发现是PCR仪加热板上的塑料板错位了,简直气的人都快疯了,哈哈
3楼2015-01-17 18:35:33
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:28:18
难不成是EP管?枪头?枪?有问题?70%酒精把大小枪的下端细孔内清理清理看看?

另外,PCR仪样品槽的板子和下端的加热板有没有错位?实验室以前有个人无意中把板子和加热板错开了一点点但未发觉,结果后面的人每次做PCR,EP管都插错位了,放在了散热孔上,不是加热孔上,PCR也是弥散一片,当时到处找原因,最后才发现是PCR仪加热板上的塑料板错位了一排,气的人都快疯了,哈哈
4楼2015-01-17 18:35:42
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
昺昺: 金币+5, 有帮助 2015-01-17 22:02:41
其实我觉得应该是最近实验室里空气污染啥的,过段时间应该能好,我们也约见过这种情况,过段时间就好了
5楼2015-01-17 19:49:14
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昺昺

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:35:33
另外,PCR仪放样品的板子和下端的加热板有没有错位?实验室以前有个人无意中把板子和加热板错开了一点点但未发觉,结果后面的人每次做PCR,EP管都插错位了,放在了散热孔上,不是加热孔上,PCR结果也是弥散一片,当 ...

多谢指点,我明天检查一下PCR仪
太阳出来,星星要走。
6楼2015-01-17 22:02:11
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昺昺

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-17 19:49:14
其实我觉得应该是最近实验室里空气污染啥的,过段时间应该能好,我们也约见过这种情况,过段时间就好了

真有这事!多谢!
太阳出来,星星要走。
7楼2015-01-17 22:03:28
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