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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助关于番茄TY3标记（P6-25）PCR检测所遇到的奇怪问题！！！
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昺昺

木虫 (小有名气)

[求助] 求助关于番茄TY3标记（P6-25）PCR检测所遇到的奇怪问题！！！ 已有2人参与

我们实验室用番茄TY3标记（P6-25）对番茄育种材料进行抗性检测，一直出现问题，现将问题描述如下：
      我们进行番茄样品的大量检测，刚开始的时候这对引物的效果还不错，但之后绝大多数DNA样品均出现整个泳道弥散的状况（明天我再上图，现在手头没有），这里提取DNA用的都是试剂盒，我们怀疑过DNA质量的问题，就用CTAB以及天根的试剂盒，包括引物换过生工和英俊的，都没有任何改善。
      在此之后，我们带着我们的引物、DNA去外地农科院找原因，描述一下我做的主要实验，也是很困惑的地方：
       1 首先，我们的样品在农科院提的DNA分别用我们的引物和农科院的引物进行PCR，结果我们的引物仍然出现泳道弥散的状况，而他们的引物P出很清晰的条带。
      2  至此，我觉得问题找到了，就带着农科院的引物、混合酶、DNA回到我们实验室，做重复，结果仍然泳道弥散。
       3 我们也怀疑过我们实验室的PCR仪、水和TAE电泳系统的问题，用哇哈哈纯净水进过高温灭菌更换了水和整个TAE电泳液，结果仍然重复不出来。
      4 我们带着做PCR的所有东西到当地一所大学，用他们的PCR仪和电泳系统，依旧重复不出来，带着一部分PCR产物回我们实验室跑电泳，结果依旧。
     描述不清的地方请再问我，非常感谢！      
我们似乎排除了所有的因素，已经找不到头绪了，还望高手不吝赐教！感激不尽！
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太阳出来，星星要走。
1楼 2015-01-16 20:32:51
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
难不成是EP管？枪头？枪？有问题？70%酒精把大小枪的下端细孔内清理清理看看？
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2楼2015-01-17 18:28:18
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
昺昺(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-17 19:49:44
昺昺: 金币+5, ★有帮助 2015-01-17 22:01:40
另外，PCR仪放样品的板子和下端的加热板有没有错位？实验室以前有个人无意中把板子和加热板错开了一点点但未发觉，结果后面的人每次做PCR，EP管都插错位了，放在了散热孔上，不是加热孔上，PCR结果也是弥散一片，当时到处找原因，最后才发现是PCR仪加热板上的塑料板错位了，简直气的人都快疯了，哈哈
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3楼2015-01-17 18:35:33
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:28:18
难不成是EP管？枪头？枪？有问题？70%酒精把大小枪的下端细孔内清理清理看看？

另外，PCR仪样品槽的板子和下端的加热板有没有错位？实验室以前有个人无意中把板子和加热板错开了一点点但未发觉，结果后面的人每次做PCR，EP管都插错位了，放在了散热孔上，不是加热孔上，PCR也是弥散一片，当时到处找原因，最后才发现是PCR仪加热板上的塑料板错位了一排，气的人都快疯了，哈哈
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4楼2015-01-17 18:35:42
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
昺昺: 金币+5, ★有帮助 2015-01-17 22:02:41
其实我觉得应该是最近实验室里空气污染啥的，过段时间应该能好，我们也约见过这种情况，过段时间就好了
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5楼2015-01-17 19:49:14
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昺昺

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-17 18:35:33
另外，PCR仪放样品的板子和下端的加热板有没有错位？实验室以前有个人无意中把板子和加热板错开了一点点但未发觉，结果后面的人每次做PCR，EP管都插错位了，放在了散热孔上，不是加热孔上，PCR结果也是弥散一片，当 ...

多谢指点，我明天检查一下PCR仪
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太阳出来，星星要走。
6楼2015-01-17 22:02:11
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昺昺

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-17 19:49:14
其实我觉得应该是最近实验室里空气污染啥的，过段时间应该能好，我们也约见过这种情况，过段时间就好了

真有这事！多谢！
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太阳出来，星星要走。
7楼2015-01-17 22:03:28
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