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求助关于番茄TY3标记(P6-25)PCR检测所遇到的奇怪问题!!! 已有2人参与
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我们实验室用番茄TY3标记(P6-25)对番茄育种材料进行抗性检测,一直出现问题,现将问题描述如下: 我们进行番茄样品的大量检测,刚开始的时候这对引物的效果还不错,但之后绝大多数DNA样品均出现整个泳道弥散的状况(明天我再上图,现在手头没有),这里提取DNA用的都是试剂盒,我们怀疑过DNA质量的问题,就用CTAB以及天根的试剂盒,包括引物换过生工和英俊的,都没有任何改善。 在此之后,我们带着我们的引物、DNA去外地农科院找原因,描述一下我做的主要实验,也是很困惑的地方: 1 首先,我们的样品在农科院提的DNA分别用我们的引物和农科院的引物进行PCR,结果我们的引物仍然出现泳道弥散的状况,而他们的引物P出很清晰的条带。 2 至此,我觉得问题找到了,就带着农科院的引物、混合酶、DNA回到我们实验室,做重复,结果仍然泳道弥散。 3 我们也怀疑过我们实验室的PCR仪、水和TAE电泳系统的问题,用哇哈哈纯净水进过高温灭菌更换了水和整个TAE电泳液,结果仍然重复不出来。 4 我们带着做PCR的所有东西到当地一所大学,用他们的PCR仪和电泳系统,依旧重复不出来,带着一部分PCR产物回我们实验室跑电泳,结果依旧。 描述不清的地方请再问我,非常感谢! 我们似乎排除了所有的因素,已经找不到头绪了,还望高手不吝赐教!感激不尽! |
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3楼2015-01-17 18:35:33
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红卫大兵
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