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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助pcr 问题 急急急，拜托了
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小点心

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助pcr 问题 急急急，拜托了

最近做PCR总是出现弥散条带，以前做的时候都没有出现过 但是最近只要做一次就会出现弥散，请大家帮帮我，看看是什么原因啊


还有我做的是25微升体系
mix：12.5
引物：1
酶：0.25
模板：1


拜托大家了  很急哎

以前做的pcr



最近一直做的pcr
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1楼 2012-04-26 22:32:43
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新购买一批新的试剂试试，你体系没变，不好分析
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2楼2012-04-26 23:02:39
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liukun261

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-27 13:52:25
本帖内容被屏蔽
3楼2012-04-26 23:17:46
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-27 13:52:38
可能是是专一性扩增不够。措施：适当降低taq酶浓度；增加退火温度；缩短退火时间；降低镁离子浓度；减少循环；降低引物浓度；可以考虑加入少量BSA。
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4楼2012-04-27 00:37:59
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adili

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
重新配制电泳液，并优化一下体系，DNA用上2或2.5试试
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耐心，细心，信心缺一不可
5楼2012-04-27 00:42:21
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huiee

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-27 13:52:54
ladder跑的很好 说明agrose gel体系没问题
只能在PCR体系找原因。
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6楼2012-04-27 03:00:49
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小点心

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-04-26 23:02:39:
重新购买一批新的试剂试试，你体系没变，不好分析

做50 微升也是一样啊
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7楼2012-04-27 10:23:32
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小点心

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by adili at 2012-04-27 00:42:21:
重新配制电泳液，并优化一下体系，DNA用上2或2.5试试

我也有把DNA 加到2唉，但是也不行  空白也会有弥散，是污染了还是别的问题啊
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8楼2012-04-27 10:24:58
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小点心

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凌波丽 at 2012-04-27 00:37:59:
可能是是专一性扩增不够。措施：适当降低taq酶浓度；增加退火温度；缩短退火时间；降低镁离子浓度；减少循环；降低引物浓度；可以考虑加入少量BSA。

这样啊，我试试看吧 谢谢
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9楼2012-04-27 10:25:24
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小点心

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huiee at 2012-04-27 03:00:49:
ladder跑的很好 说明agrose gel体系没问题
只能在PCR体系找原因。

怎么在体系上找原因啊
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10楼2012-04-27 10:26:59
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