24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2444  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒与目的片段连接 已有1人参与

各位师兄师姐同学们,我最近在构建敲除质粒,奇怪的是对照的菌比其他的板子长得都多,做了三次,都是这样的,而且菌落PCR没有目的片段,测序也全部不行,按理说,目的片段是合成的呀,怎么会连不进去呢?还长得比对照少?大家有没有遇到类似的情况呢?

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

↖(^ω^)↗
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemary

新虫 (初入文坛)

9楼2018-03-12 21:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-24 07:45:42
给的信息太少了;载体酶切尽量充分保证酶切完全,跑胶回收,最好做个去磷酸化;连接时注意vector和insert的比例;最好设置负对照,不加insert(等量的灭菌水)。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗?用的什么质粒啊?
2楼2017-05-23 14:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了;载体酶切尽量充分保证酶切完全,跑胶回收,最好做个去磷酸化;连接时注意vector和insert的比例;最好设置负对照,不加insert(等量的灭菌水)。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗?用的什么质粒啊?

目的片段合成的,是没有磷酸基团的,所以不能去磷酸化

发自小木虫IOS客户端
↖(^ω^)↗
3楼2017-05-23 22:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了;载体酶切尽量充分保证酶切完全,跑胶回收,最好做个去磷酸化;连接时注意vector和insert的比例;最好设置负对照,不加insert(等量的灭菌水)。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗?用的什么质粒啊?

我想做慢病毒质粒,用的pSIREN....英文名称具体记不大清楚了,是一种转录绿色荧光质粒

发自小木虫IOS客户端
↖(^ω^)↗
4楼2017-05-23 22:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿双一流机械285分求调剂 +3 幸运的三木 2026-03-29 4/200 2026-03-29 10:46 by 想上岸了呜呜
[考研] 330分求调剂 +5 qzenlc 2026-03-29 5/250 2026-03-29 07:37 by 无际的草原
[考研] 295材料工程专硕求调剂 +7 1428151015 2026-03-27 7/350 2026-03-28 19:58 by S240
[考研] 311(085601)求调剂 +4 liziyeyeye 2026-03-28 4/200 2026-03-28 18:50 by 535743368
[考研] 311求调剂 +9 lin0039 2026-03-26 9/450 2026-03-28 13:05 by 唐沐儿
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 085600,材料与化工321分调剂 +4 大馋小子 2026-03-27 6/300 2026-03-27 14:11 by 松花缸1201
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 一志愿吉大071010,316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 材料调剂 +3 iwinso 2026-03-23 3/150 2026-03-25 11:29 by greychen00
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见