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幕竹清风

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[求助] 质粒与目的片段连接已有1人参与

各位师兄师姐同学们，我最近在构建敲除质粒，奇怪的是对照的菌比其他的板子长得都多，做了三次，都是这样的，而且菌落PCR没有目的片段，测序也全部不行，按理说，目的片段是合成的呀，怎么会连不进去呢？还长得比对照少？大家有没有遇到类似的情况呢？

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1楼2017-05-20 00:06:29

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莫落

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【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-24 07:45:42

给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

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2楼2017-05-23 14:15:47

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幕竹清风

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

目的片段合成的，是没有磷酸基团的，所以不能去磷酸化

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3楼2017-05-23 22:29:28

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