应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒与目的片段连接
91/1返回列表
查看: 2625  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

幕竹清风

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒与目的片段连接 已有1人参与

各位师兄师姐同学们，我最近在构建敲除质粒，奇怪的是对照的菌比其他的板子长得都多，做了三次，都是这样的，而且菌落PCR没有目的片段，测序也全部不行，按理说，目的片段是合成的呀，怎么会连不进去呢？还长得比对照少？大家有没有遇到类似的情况呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
↖(^ω^)↗
1楼 2017-05-20 00:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-24 07:45:42
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？
赞一下 回复此楼
2楼2017-05-23 14:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

目的片段合成的，是没有磷酸基团的，所以不能去磷酸化

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
3楼2017-05-23 22:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

我想做慢病毒质粒，用的pSIREN....英文名称具体记不大清楚了，是一种转录绿色荧光质粒

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
4楼2017-05-23 22:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
可能是载体自连了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-23 23:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
合成的片段也要酶切一下在连接的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-23 23:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 23:05:56
合成的片段也要酶切一下在连接的

公司合成的片段在设计的时候就考虑到了酶切位点，所以合成的应该是酶切后的末端

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
7楼2017-05-24 00:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
我们合成的片段都是放在载体上的，你先跟公司了解一下吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-24 07:49:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemary

新虫 (初入文坛)
请问你的问题解决了吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-03-12 21:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 幕竹清风 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 6/300 2026-11-01 12:53 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 7/350 2026-11-01 12:40 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 12:38 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 12:27 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 11/550 2026-11-01 12:24 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 5/250 2026-11-01 11:14 by BCdvBAEpt3zm
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 11:09 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 9/450 2026-11-01 10:53 by BCdvBAEpt3zm
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 26/1300 2026-11-01 10:22 by BCdvBAEpt3zm
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 07:01 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-01 05:48 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 03:56 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 02:19 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 2027博士申请-临床检验诊断学、病原生物学、微生物方向 50+3 yyh@ 2026-10-28 4/200 2026-10-31 12:47 by 可淡不可忘
[硕博家园] 申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请 +3 小小阿光 2026-10-27 3/150 2026-10-29 23:56 by 起风了的快乐
[考博] 申博求助 20+3 Katrinae 2026-10-26 4/200 2026-10-27 09:56 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭