应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒与目的片段连接
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 2441  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

幕竹清风

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒与目的片段连接 已有1人参与

各位师兄师姐同学们，我最近在构建敲除质粒，奇怪的是对照的菌比其他的板子长得都多，做了三次，都是这样的，而且菌落PCR没有目的片段，测序也全部不行，按理说，目的片段是合成的呀，怎么会连不进去呢？还长得比对照少？大家有没有遇到类似的情况呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
↖(^ω^)↗
1楼 2017-05-20 00:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-24 07:45:42
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？
赞一下 回复此楼
2楼2017-05-23 14:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

目的片段合成的，是没有磷酸基团的，所以不能去磷酸化

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
3楼2017-05-23 22:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

我想做慢病毒质粒，用的pSIREN....英文名称具体记不大清楚了，是一种转录绿色荧光质粒

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
4楼2017-05-23 22:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
可能是载体自连了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-23 23:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
合成的片段也要酶切一下在连接的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-23 23:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 23:05:56
合成的片段也要酶切一下在连接的

公司合成的片段在设计的时候就考虑到了酶切位点，所以合成的应该是酶切后的末端

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
7楼2017-05-24 00:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
我们合成的片段都是放在载体上的，你先跟公司了解一下吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-24 07:49:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemary

新虫 (初入文坛)
请问你的问题解决了吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-03-12 21:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 幕竹清风 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +7 c297914 2026-03-28 7/350 2026-03-29 01:17 by 544594351
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +9 天天好运来上岸� 2026-03-24 10/500 2026-03-28 22:17 by chemzp
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 学硕274求调剂 +9 Li李鱼 2026-03-26 9/450 2026-03-28 21:42 by bymhappy
[考研] 332求调剂 +4 @MZB382400 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:02 by 唐沐儿
[考研] 085600，材料与化工321分求调剂 +9 大馋小子 2026-03-28 9/450 2026-03-28 14:56 by 神马都不懂
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-27 5/250 2026-03-28 14:25 by 唐沐儿
[考研] 0703化学 +10 妮妮ninicgb 2026-03-27 10/500 2026-03-28 14:07 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 291求调剂 +6 HanBeiNingZC 2026-03-24 6/300 2026-03-28 07:55 by baoball
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 325求调剂 +5 李嘉图·S·路 2026-03-23 5/250 2026-03-27 00:42 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭