应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒与目的片段连接
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 2452  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

幕竹清风

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒与目的片段连接 已有1人参与

各位师兄师姐同学们，我最近在构建敲除质粒，奇怪的是对照的菌比其他的板子长得都多，做了三次，都是这样的，而且菌落PCR没有目的片段，测序也全部不行，按理说，目的片段是合成的呀，怎么会连不进去呢？还长得比对照少？大家有没有遇到类似的情况呢？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
↖(^ω^)↗
1楼 2017-05-20 00:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-24 07:45:42
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？
赞一下 回复此楼
2楼2017-05-23 14:15:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

目的片段合成的，是没有磷酸基团的，所以不能去磷酸化

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
3楼2017-05-23 22:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 14:15:47
给的信息太少了；载体酶切尽量充分保证酶切完全，跑胶回收，最好做个去磷酸化；连接时注意vector和insert的比例；最好设置负对照，不加insert（等量的灭菌水）。

话说构建的时细菌的敲除质粒吗？用的什么质粒啊？

我想做慢病毒质粒，用的pSIREN....英文名称具体记不大清楚了，是一种转录绿色荧光质粒

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
4楼2017-05-23 22:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
可能是载体自连了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-23 23:05:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
合成的片段也要酶切一下在连接的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2017-05-23 23:05:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幕竹清风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫落 at 2017-05-23 23:05:56
合成的片段也要酶切一下在连接的

公司合成的片段在设计的时候就考虑到了酶切位点，所以合成的应该是酶切后的末端

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
↖(^ω^)↗
7楼2017-05-24 00:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
我们合成的片段都是放在载体上的，你先跟公司了解一下吧

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-24 07:49:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hemary

新虫 (初入文坛)
请问你的问题解决了吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-03-12 21:52:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 幕竹清风 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 309求调剂 +7 谁不是少年 2026-03-29 7/350 2026-03-29 13:17 by mumin1990
[考研] 一志愿北京理工大学本科211材料工程294求调剂 +8 mikasa的围巾 2026-03-28 8/400 2026-03-29 12:48 by 无际的草原
[考研] 340求调剂 +6 Amber00 2026-03-26 6/300 2026-03-29 12:06 by 无际的草原
[考研] 生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338 +6 YYYYYNNNNN 2026-03-26 7/350 2026-03-28 20:52 by 唐沐儿
[考研] 339求调剂，想调回江苏 +6 烤麦芽 2026-03-27 8/400 2026-03-28 10:40 by 烤麦芽
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 312求调剂 +9 上岸吧ZJY 2026-03-22 13/650 2026-03-27 11:24 by sanrepian
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭