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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用cDNA做PCR扩增不出来。
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六号风

新虫 (初入文坛)

[求助] 用cDNA做PCR扩增不出来。 已有3人参与

我是一名大二本科生，前两天刚开始用小木虫。想要克隆玉米的一个基因，然后把它转到拟南芥中表达，该基因的cDNA上游GC含量超高，做PCR扩增不出来。
       请问各位大佬可以用玉米的DNA做PCR吗？扩出来的序列含内含子对表达会有影响吗?
       还请大佬解释一下PCR时用cDNA和DNA做模板，两者有什么区别?

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2017-05-02 17:18:17
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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
GC含量高的可以用GC buffer 或者enhancer 去扩增，只是测序可能比较难测

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竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
9楼2017-05-03 20:56:14
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-02 19:27:25
如果你的基因有内含子，你用DNA做模板，扩出来的产物有内含子，一般不建议用含内含子的序列构建表达载体，因为剪接体系不完全一样，不一定能正确剪切形成和玉米里一样的成熟mRNA。
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2楼2017-05-02 18:04:56
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Nitara

新虫 (正式写手)
建议还用cdna  你可以设计几个退货温度梯度  试试行不

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3楼2017-05-03 07:23:47
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六号风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Nitara at 2017-05-03 07:23:47
建议还用cdna  你可以设计几个退货温度梯度  试试行不

cDNA5'端GC含量太高了，百分之八九十，引物不好设计。

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4楼2017-05-03 08:21:14
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