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yqs129219

新虫 (小有名气)

[求助] pcr扩增无目的条带啊，

小弟在做cdna的扩增，做同源序列的克隆，引物是根据抗病基因保守结构域设计的。目的片段500bp，引物是上海生工合成的，
引物为：F：GGI GGI WSI GGI AAR ACI AC
             R：CAA CGC TAG TGG CAA TCC
单子上F引物和R引物的Tm值分别是56.77和57.3。所用的是pcr mix，，反应体系（
mix 12.5ul  F引物0.5ul（10uM）  R引物0.5ul（10uM） 反转录得到CDNA稀释5倍后取2Ul  ddh2o补足25ul），反应程序：94°3min  94° 30s  退火温度  72°1min  72°10Min ,31个循环，退火温度48 50 52 53 54 55 56 57 58 60 62 64 这么多温度都试过就是扩增不出来，但是做内参就能扩增出来，求高手指点啊。是不是引物的问题，引物有一管刚开始寄过来粉末状的时候打开过，后来才用DEPC水溶解的，不知道有没有影响。溶解引物的时候剧烈漩涡有没有影响呢。求高手赐教，
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1楼 2012-08-08 21:43:11
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yqs129219

新虫 (小有名气)
扩增后电泳什么都看不到，真不知道是什么原因
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2楼2012-08-08 22:02:34
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