| 查看: 630 | 回复: 1 | |||
[求助]
pcr扩增无目的条带啊，
|
|
小弟在做cdna的扩增，做同源序列的克隆，引物是根据抗病基因保守结构域设计的。目的片段500bp，引物是上海生工合成的， 引物为：F：GGI GGI WSI GGI AAR ACI AC R：CAA CGC TAG TGG CAA TCC 单子上F引物和R引物的Tm值分别是56.77和57.3。所用的是pcr mix，，反应体系（ mix 12.5ul F引物0.5ul（10uM） R引物0.5ul（10uM） 反转录得到CDNA稀释5倍后取2Ul ddh2o补足25ul），反应程序：94°3min 94° 30s 退火温度 72°1min 72°10Min ,31个循环，退火温度48 50 52 53 54 55 56 57 58 60 62 64 这么多温度都试过就是扩增不出来，但是做内参就能扩增出来，求高手指点啊。是不是引物的问题，引物有一管刚开始寄过来粉末状的时候打开过，后来才用DEPC水溶解的，不知道有没有影响。溶解引物的时候剧烈漩涡有没有影响呢。求高手赐教， |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有286人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 胶回收后再次pcr无目的条带，急，望神人指点。。。
已经有16人回复
- 这样的电泳图片是否代表PCR扩增成功了？
已经有26人回复
- OVER-LAP PCR第二轮扩增不出来条带
已经有6人回复
- PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
已经有4人回复
- 基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱 求助
已经有3人回复
- PCR扩增结果
已经有11人回复
- PCR扩增不出条带
已经有9人回复
- PCR扩增问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】PCR电泳结果疑问
已经有13人回复
- 【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
已经有5人回复
2楼2012-08-08 22:02:34