| 查看: 1645 | 回复: 4 | ||
[求助]
长片段PCR扩增 已有2人参与
|
| 大家好，想请教下：我做全长克隆，分两段分别设计引物扩增目的片段，先反转为cDNA，再PCR。我的片段一段为4324bp，一段为2100bp，但是4324bp的一直扩增不出来，引物二聚体挺亮。2100bp扩增出来了，但特异性不好。我用的takara的PrimeScript II 1st Strand cDNA合成试剂盒合成cDNA，PCR用PrimeSTAR Max DNA Polymerase和LA Taq with GC Buffer 分别扩增过，长片段一直也扩增不出来，我的PCR程序：98℃ 2min,(98℃ 10s, 60℃ 15s, 72℃ 5min)*35, 72℃ 5min。中途解链时间，退火温度时间均延长过，一直没结果。引物是没有问题的，已检查比对过。谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有144人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于pcr扩增目的片段的问题
已经有7人回复
- 求长片段pcr扩增大神！！！！！
已经有22人回复
- 长片段PCR点样孔亮带，目的条带无法扩增
已经有0人回复
- 长片段DNA扩增后电泳挂孔问题
已经有8人回复
- 10kb长片段pcr参数该设置什么
已经有3人回复
- 大神请留步！！！长片段ＰＣＲ扩增！！！
已经有5人回复
- 急求，pcr扩增cDNA时扩增出了基因组的片段。接下来该怎么办。
已经有4人回复
- 关于PCR 扩增 引物可以扩增多长的模板
已经有4人回复
- 求长片段（7.5 kb）PCR扩增方法？
已经有17人回复
- PCR扩增环状质粒全长怎么做？
已经有1人回复
- 菜鸟求助：PCR扩增和扩增产物的克隆？？
已经有9人回复
- 噬菌体文库PCR扩增扩不出片段
已经有4人回复
- 关于长片段PCR
已经有2人回复
- 鼠基因组的PCR扩增
已经有4人回复
- 有谁做过长片段PCR（15K左右）
已经有1人回复
- 短片段PCR扩增
已经有7人回复
- 长片段PCR扩增
已经有4人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】为什么PCR扩增产物片段长度比设计时的要长很多？
已经有10人回复
凯伦爱佳佳
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 1571.1
- 散金: 97
- 红花: 1
- 帖子: 321
- 在线: 75.5小时
- 虫号: 3487227
- 注册: 2014-10-20
- 性别: GG
- 专业: 水产生物免疫学与病害控制
2楼2015-11-01 21:48:52
zhangyao7255
新虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 478.7
- 红花: 4
- 帖子: 109
- 在线: 29.2小时
- 虫号: 640444
- 注册: 2008-10-29
- 性别: GG
- 专业: 发育生物学
3楼2015-11-01 23:22:42
足下客
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 10
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1858.8
- 散金: 211
- 红花: 12
- 帖子: 888
- 在线: 110.4小时
- 虫号: 426612
- 注册: 2007-07-28
- 性别: MM
- 专业: 临床分子生物学检验
4楼2015-11-02 08:45:28
5楼2015-11-03 09:33:34