24小时热门版块排行榜

返回列表

李袁硕

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 201.5
帖子: 9
在线: 3.5小时
虫号: 3363090
注册: 2014-08-12
专业: 植物遗传学

[交流] 长片段DNA扩增后电泳挂孔问题已有3人参与

本人在做长片段的PCR，片段长度大约18kb左右。用1%琼脂糖120V20mins电泳，发现DNA全部停留在胶孔中，比较亮。之后加入等体积的水，电泳，仍有挂孔现象，但目的片段附近有一浅带。将产物放于94度1min，16度正无穷。电泳发现挂孔现象消失（一点都没有了），但是没有主带了，附近弥散装。能否解释？

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

电泳的时候，总DNA跑出条带，PCR扩增后没有条带，都有什么原因啊已经有8人回复
pcr扩增后的电泳图为什么是这个样子？该如何改进已经有16人回复
SRAP-PCR扩增产物电泳已经有12人回复
这样的电泳图片是否代表PCR扩增成功了？已经有26人回复
求鉴定PCR扩增电泳图已经有8人回复
CBF1基因扩增出的电泳条带为什么不是一条带？已经有8人回复
大家帮忙看一下16S-V3区扩增的电泳图嘛（有关DGGE）已经有3人回复
PCR扩增产物电泳，退火温度优化已经有19人回复
【求助/交流】ISSR引物扩增产物电泳图，求助各位高手~~~ 已经有10人回复

1楼 2015-01-21 22:55:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)

应助: 88 (初中生)
金币: 662.5
红花: 9
帖子: 266
在线: 66.9小时
虫号: 2072588
注册: 2012-10-16
性别: GG
专业: 蔬菜学与瓜果学

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-22 16:43:52

18k的片段跑20分钟有点短了，多跑一下，放低电压慢慢跑。出现楼主所说的情况没有见过，普通琼脂糖跑18k没有问题。可以检查一下反应体系，模板里杂质不要太多，最后产物体系太复杂，有可能造成挂孔。
将产物放于94度1min，这是什么意思呢？这样是会弥散的啊，这么长的片段不好完全复性，所以会变成乱七八糟一团麻，弥散太正常了。

赞一下

回复此楼

2楼2015-01-22 09:19:18

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zliean

金虫 (小有名气)

应助: 21 (小学生)
金币: 914.3
红花: 2
帖子: 180
在线: 57.2小时
虫号: 3229859
注册: 2014-05-24
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

胶浓度太大 0.5就行了

[ 发自小木虫客户端 ]

赞一下

回复此楼

3楼2015-01-22 09:41:00

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

李袁硕

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 201.5
帖子: 9
在线: 3.5小时
虫号: 3363090
注册: 2014-08-12
专业: 植物遗传学

引用回帖:

2楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-22 09:19:18
18k的片段跑20分钟有点短了，多跑一下，放低电压慢慢跑。出现楼主所说的情况没有见过，普通琼脂糖跑18k没有问题。可以检查一下反应体系，模板里杂质不要太多，最后产物体系太复杂，有可能造成挂孔。
将产物放于94度 ...

我的想法是片段太长且浓度太高的时候，DNA会成网状，所以就容易挂孔。所以我就变性之后再复性，看能否有主带

赞一下

回复此楼

4楼2015-01-22 13:24:20

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖