应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段DNA扩增后电泳挂孔问题
51/1返回列表
查看: 4049  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

李袁硕

铜虫 (初入文坛)

[交流] 长片段DNA扩增后电泳挂孔问题 已有3人参与

本人在做长片段的PCR，片段长度大约18kb左右。用1%琼脂糖120V20mins电泳，发现DNA全部停留在胶孔中，比较亮。之后加入等体积的水，电泳，仍有挂孔现象，但目的片段附近有一浅带。将产物放于94度1min，16度正无穷。电泳发现挂孔现象消失（一点都没有了），但是没有主带了，附近弥散装。能否解释？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-21 22:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稻稻

铜虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对于挂孔现象建议胶浓度低一些，上样量减少，跑久一些。后面的估计降解了，不清楚

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
9楼2015-01-23 23:44:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

titus0805

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-22 16:43:52
18k的片段跑20分钟有点短了，多跑一下，放低电压慢慢跑。出现楼主所说的情况没有见过，普通琼脂糖跑18k没有问题。可以检查一下反应体系，模板里杂质不要太多，最后产物体系太复杂，有可能造成挂孔。
将产物放于94度1min，这是什么意思呢？这样是会弥散的啊，这么长的片段不好完全复性，所以会变成乱七八糟一团麻，弥散太正常了。
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-22 09:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zliean

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶浓度太大 0.5就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-22 09:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李袁硕

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-22 09:19:18
18k的片段跑20分钟有点短了，多跑一下，放低电压慢慢跑。出现楼主所说的情况没有见过，普通琼脂糖跑18k没有问题。可以检查一下反应体系，模板里杂质不要太多，最后产物体系太复杂，有可能造成挂孔。
将产物放于94度 ...

我的想法是片段太长且浓度太高的时候，DNA会成网状，所以就容易挂孔。所以我就变性之后再复性，看能否有主带
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-22 13:24:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 312求调剂 +5 上岸吧ZJY 2026-03-22 7/350 2026-03-25 22:20 by 544594351
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 081700 调剂 267分 +10 迷人的哈哈 2026-03-23 10/500 2026-03-25 12:12 by userper
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生（材料、化学、电化学，环境） +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +4 曼111 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:44 by 星空星月
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +18 chaojifeixia 2026-03-19 20/1000 2026-03-24 10:34 by dolphin_ycj
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭