应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 长片段DNA扩增后电泳挂孔问题
91/1返回列表
查看: 4251  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

李袁硕

铜虫 (初入文坛)

[交流] 长片段DNA扩增后电泳挂孔问题 已有3人参与

本人在做长片段的PCR，片段长度大约18kb左右。用1%琼脂糖120V20mins电泳，发现DNA全部停留在胶孔中，比较亮。之后加入等体积的水，电泳，仍有挂孔现象，但目的片段附近有一浅带。将产物放于94度1min，16度正无穷。电泳发现挂孔现象消失（一点都没有了），但是没有主带了，附近弥散装。能否解释？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-21 22:55:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-22 16:43:52
18k的片段跑20分钟有点短了，多跑一下，放低电压慢慢跑。出现楼主所说的情况没有见过，普通琼脂糖跑18k没有问题。可以检查一下反应体系，模板里杂质不要太多，最后产物体系太复杂，有可能造成挂孔。
将产物放于94度1min，这是什么意思呢？这样是会弥散的啊，这么长的片段不好完全复性，所以会变成乱七八糟一团麻，弥散太正常了。
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-22 09:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zliean

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶浓度太大 0.5就行了

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-22 09:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李袁硕

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-22 09:19:18
18k的片段跑20分钟有点短了，多跑一下，放低电压慢慢跑。出现楼主所说的情况没有见过，普通琼脂糖跑18k没有问题。可以检查一下反应体系，模板里杂质不要太多，最后产物体系太复杂，有可能造成挂孔。
将产物放于94度 ...

我的想法是片段太长且浓度太高的时候，DNA会成网状，所以就容易挂孔。所以我就变性之后再复性，看能否有主带
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-22 13:24:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 李袁硕 at 2015-01-22 13:24:20
我的想法是片段太长且浓度太高的时候，DNA会成网状，所以就容易挂孔。所以我就变性之后再复性，看能否有主带...

你太有想象力了，dna不会呈网状！
变性以后复性是要条件的，像这么长的片段，想完全复性太难了，这时候DNA呈一种单双链和各种聚合体混杂的形态
赞一下 回复此楼
5楼2015-01-22 13:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李袁硕

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-22 13:30:43
你太有想象力了，dna不会呈网状！
变性以后复性是要条件的，像这么长的片段，想完全复性太难了，这时候DNA呈一种单双链和各种聚合体混杂的形态...

那它为什么挂孔，稀释以后就不挂孔了呢
赞一下 回复此楼
6楼2015-01-22 13:34:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

titus0805

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 李袁硕 at 2015-01-22 13:34:05
那它为什么挂孔，稀释以后就不挂孔了呢...

你产物里可能有蛋白污染，稀释以后蛋白少了
赞一下 回复此楼
7楼2015-01-22 13:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李袁硕

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-22 13:40:59
你产物里可能有蛋白污染，稀释以后蛋白少了...

今天我将他在94℃1min，92℃1min，90℃1min，68℃15mins（就是上回稀释过然后再变形成单链的样品）然后又挂孔了。按道理来说蛋白已经稀释了呢
并且这个片段每次扩增都是挂孔
赞一下 回复此楼
8楼2015-01-23 22:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稻稻

铜虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对于挂孔现象建议胶浓度低一些，上样量减少，跑久一些。后面的估计降解了，不清楚

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
9楼2015-01-23 23:44:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 李袁硕 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭