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15944682692

新虫 (初入文坛)

[交流] 大神请留步!!!长片段PCR扩增!!! 已有4人参与

小弟现想用NEB的Pushion Taq 扩增一13K的目的片段,但是怎么扩都扩不出来,分两段还可以,可以扩出一条6000的一条8000的。但是分段扩之后我把上游引物加了酶切位点和T7启动子,下游也加了酶切位点。并把引物由20bp变成了29bp之后,6000和8000的都扩不出来了?求大神啊!!!肿么破???13K的揍酶希望了咩!!!
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Ruby1

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2013-12-17 17:14:45
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

好长

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2013-12-17 22:20:58
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15944682692

新虫 (初入文坛)

是,不过这酶是可以的,94引物亍能长了,算⊥启动子和酶切位点一共四十多

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-12-18 08:40:53
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achonghello

金虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没做过这么长片段的。。。。
5楼2013-12-18 09:04:06
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半生一梦

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-27 19:59:44
貌似可以把PCR反应程序优化一下 先用你原来引物的退火温度做几个循环
然后再把退火温度设置成加了酶切位点以后的温度继续扩增
6楼2013-12-18 11:44:58
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