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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大神请留步！！！长片段ＰＣＲ扩增！！！
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15944682692

新虫 (初入文坛)

[交流] 大神请留步！！！长片段ＰＣＲ扩增！！！ 已有4人参与

小弟现想用NEB的Pushion Taq 扩增一13K的目的片段，但是怎么扩都扩不出来，分两段还可以，可以扩出一条6000的一条8000的。但是分段扩之后我把上游引物加了酶切位点和T7启动子，下游也加了酶切位点。并把引物由20bp变成了29bp之后，6000和8000的都扩不出来了？求大神啊！！！肿么破？？？13K的揍酶希望了咩！！！
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1楼 2013-12-17 10:36:24
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Ruby1

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2013-12-17 17:14:45
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)
好长

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2013-12-17 22:20:58
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15944682692

新虫 (初入文坛)
是，不过这酶是可以的，94引物亍能长了，算⊥启动子和酶切位点一共四十多

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-12-18 08:40:53
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achonghello

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没做过这么长片段的。。。。
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5楼2013-12-18 09:04:06
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半生一梦

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 19:59:44
貌似可以把PCR反应程序优化一下 先用你原来引物的退火温度做几个循环
然后再把退火温度设置成加了酶切位点以后的温度继续扩增
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6楼2013-12-18 11:44:58
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