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大神请留步！！！长片段ＰＣＲ扩增！！！已有4人参与
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小弟现想用NEB的Pushion Taq 扩增一13K的目的片段，但是怎么扩都扩不出来，分两段还可以，可以扩出一条6000的一条8000的。但是分段扩之后我把上游引物加了酶切位点和T7启动子，下游也加了酶切位点。并把引物由20bp变成了29bp之后，6000和8000的都扩不出来了？求大神啊！！！肿么破？？？13K的揍酶希望了咩！！！ |
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