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wuyuanqing金虫 (正式写手)
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反转录PCR
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| 本人小硕一枚，今年毕业在某科研单位工作，现在做的项目是异源表达某人源的蛋白和短肽，编码蛋白的基因长度均在4.4kb左右，GC含量均在66%左右，短肽长159bp，我做了数次反转录PCR，合成cDNA后进行PCR扩增，优化了扩增的温度，延伸时间、添加甘油及DMSO等，总是扩增不出来目的基因，即使有PCR产物也在1kb一下，不知道是为什么？是酶的问题吗？我用的是全式金快酶pfu，合成cDNA后扩增内参基因没有任何问题。请高人指点。 |
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GC含量有点高~给你推荐下阅微基因的复杂模版的2G Robust酶. 你可以打010-82162711找他们要个试用装。 |
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wuyuanqing
2楼2013-07-15 16:05:13
wuyuanqing
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【答案】应助回帖
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| 我觉得可能是你的RNA样品中的基因组DNA没有消化干净，设计的引物跨内含子，所以P出来的片段比预期的大。 |
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4楼2013-07-16 01:29:54
wuyuanqing
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5楼2013-07-16 08:18:47
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6楼2013-07-16 11:36:51