| 查看: 1146 | 回复: 5 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
wuyuanqing金虫 (正式写手)
|
[求助]
反转录PCR
|
|
| 本人小硕一枚，今年毕业在某科研单位工作，现在做的项目是异源表达某人源的蛋白和短肽，编码蛋白的基因长度均在4.4kb左右，GC含量均在66%左右，短肽长159bp，我做了数次反转录PCR，合成cDNA后进行PCR扩增，优化了扩增的温度，延伸时间、添加甘油及DMSO等，总是扩增不出来目的基因，即使有PCR产物也在1kb一下，不知道是为什么？是酶的问题吗？我用的是全式金快酶pfu，合成cDNA后扩增内参基因没有任何问题。请高人指点。 |
回复此楼» 猜你喜欢
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有92人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
6楼2013-07-16 11:36:51
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
GC含量有点高~给你推荐下阅微基因的复杂模版的2G Robust酶. 你可以打010-82162711找他们要个试用装。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
wuyuanqing
2楼2013-07-15 16:05:13
wuyuanqing
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 4703.7
- 散金: 50
- 红花: 3
- 帖子: 458
- 在线: 243.7小时
- 虫号: 1210774
- 注册: 2011-02-23
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
3楼2013-07-15 16:16:14
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
| 我觉得可能是你的RNA样品中的基因组DNA没有消化干净，设计的引物跨内含子，所以P出来的片段比预期的大。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2013-07-16 01:29:54
