| 查看: 1103 | 回复: 1 | ||
angjzy木虫 (小有名气)
|
[求助]
做cDNA的PCR扩增没有结果呀！
|
|
做了一个cDNA，用这段基因扩增actin做阳性对照，能扩增出正确片段。 说明体系、模板都没问题。 用目的基因特异引物扩增，怎么也扩不出来。 这个引物以前有师兄用过，能正确扩出目的片段。 说明引物序列没问题。 但现在我做怎么也做不出来。 怀疑引物不好用了， 就用了new aliquote 引物，还是扩不出来。 求助大虾们，这是怎么个情况呀，怎么能把它弄出来呢？ 博士刚开始，就遇到这种问题，崩溃ing~~~ [ Last edited by angjzy on 2011-10-11 at 04:33 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有224人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 小白请问，cDNA第一条链合成后如何做PCR了？
已经有5人回复
- 反转录高手进来~~
已经有8人回复
- 请教real time pcr问题，谢谢！
已经有10人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- 想问下在以cDNA为模板时，PCR的结果却是徒步 什么原因
已经有5人回复
- ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR中cdna合成的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】从RNA到cDNA合成再到克隆PCR的实验技巧和操作细节问题若干，寻求解答
已经有12人回复
- 【求助/交流】以cDNA为模板PCR扩增目的片段时条带较浅原因
已经有13人回复
- RT-PCR后的cDNA呢？
已经有17人回复
红多多
木虫 (正式写手)
版筑饭牛的日子
- MolEPI: 12
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2295.5
- 红花: 7
- 帖子: 340
- 在线: 22.3小时
- 虫号: 303085
- 注册: 2006-12-03
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-11 09:25:41
angjzy(金币+3): 太谢谢了，我试试。希望大家都顺利哈 2011-10-12 01:46:27
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-11 09:25:41
angjzy(金币+3): 太谢谢了，我试试。希望大家都顺利哈 2011-10-12 01:46:27
|
呵呵 分子方面的实验就是这个样子的 总有些说不清道不明的原因 楼主这种原因我以前也经常遇到，有时候重复做几次PCR就能出来，有时候就是死命都没结果。 我的建议就是 1.先重复几次实验，有时候会由于一些比较低级的问题，比如忘加某组分，或者忘记离心，或者其他由于误差等等原因产生，会出不来结果，有时候同样的东西，做两个重复也会一个出一个不出，我把这个归结为人品不好，暴率比较低的缘故。 2.要弄清楚你扩增片段所处整个mRNA的位置，说简单点，你的ACTIN能扩出来不代表你的片段能扩增出来，特别是你如果扩增基因全长的时候，因为ACTION往往丰度高，即使有部分RNA降解也很可能有全长。另外即使没有全长ACTIN，你设计的引物如果不再整个序列的前端，这个也是说明不了模版质量的，总之actin的设计，一定要设计在序列比较靠末端的位置，用actin检测模版质量，至少需要稀释100倍检测。这个是我们实验室的玩法，非常有效.所以，你应该考虑重新提取RNA或者重新反转录试试结果。 一点个人看法，希望对你有用，祝实验成功 |
2楼2011-10-11 09:09:25
