应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用cDNA做PCR扩增不出来。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
171/2返回列表12下一页
查看: 4098  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

六号风

新虫 (初入文坛)

[求助] 用cDNA做PCR扩增不出来。 已有3人参与

我是一名大二本科生，前两天刚开始用小木虫。想要克隆玉米的一个基因，然后把它转到拟南芥中表达，该基因的cDNA上游GC含量超高，做PCR扩增不出来。
       请问各位大佬可以用玉米的DNA做PCR吗？扩出来的序列含内含子对表达会有影响吗?
       还请大佬解释一下PCR时用cDNA和DNA做模板，两者有什么区别?

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-05-02 17:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Nitara

新虫 (正式写手)
建议还用cdna  你可以设计几个退货温度梯度  试试行不

发自小木虫Android客户端
赞一下(3人) 回复此楼
3楼2017-05-03 07:23:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-02 19:27:25
如果你的基因有内含子，你用DNA做模板，扩出来的产物有内含子，一般不建议用含内含子的序列构建表达载体，因为剪接体系不完全一样，不一定能正确剪切形成和玉米里一样的成熟mRNA。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2017-05-02 18:04:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
GC含量高的可以用GC buffer 或者enhancer 去扩增，只是测序可能比较难测

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
9楼2017-05-03 20:56:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)
或者使用高保真酶如kod plus neo

发自小木虫IOS客户端
赞一下(2人) 回复此楼
竹杖芒鞋轻胜马，谁怕，一蓑烟雨任平生；回首向来萧瑟处，归去，也无风雨也无晴
10楼2017-05-03 20:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁文峰

新虫 (小有名气)
★
六号风(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-05 08:45:41
dna一定不行。。异源表达未必能准确切除内含子，并且也会影响目的基因的表达及其原本的功能。。说回来，拟南芥中表达也不一定能准确展现目的基因功能。。

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
所追求的不在明天，而在现在以前
12楼2017-05-04 21:07:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁文峰

新虫 (小有名气)
用高GC buffer进行pcr

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
所追求的不在明天，而在现在以前
13楼2017-05-04 21:08:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

宁文峰

新虫 (小有名气)
拟南芥是模式植物，用拟南芥就是考虑了周期及操作问题。。主要看你那是一个什么基因，打个比方，如果是促进纤维化 抗倒伏的基因，那在拟南芥中可能不易观察表型。。所以拟南芥适不适合还是要看那是一个什么基因。。

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
所追求的不在明天，而在现在以前
15楼2017-05-05 17:55:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

六号风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Nitara at 2017-05-03 07:23:47
建议还用cdna  你可以设计几个退货温度梯度  试试行不

cDNA5'端GC含量太高了，百分之八九十，引物不好设计。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-05-03 08:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

六号风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2017-05-02 18:04:56
如果你的基因有内含子，你用DNA做模板，扩出来的产物有内含子，一般不建议用含内含子的序列构建表达载体，因为剪接体系不完全一样，不一定能正确剪切形成和玉米里一样的成熟mRNA。

有没有什么技术方法先用DNA扩增，再去掉内含子呢？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-05-03 08:25:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by 六号风 at 2017-05-03 08:21:14
cDNA5'端GC含量太高了，百分之八九十，引物不好设计。
...

你往MRNA外面扩，ATG外面还是有序列的。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2017-05-03 08:33:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

六号风

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 781055707 at 2017-05-03 08:33:08
你往MRNA外面扩，ATG外面还是有序列的。...

GC含量依然很高

发自小木虫Android客户端
回复此楼
7楼2017-05-03 08:35:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vmp651312

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你mRNA提取 反转录和PCR都用的什么试剂？
赞一下 回复此楼
8楼2017-05-03 16:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 六号风 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +28 洛神哥哥 2026-03-31 28/1400 2026-04-01 22:51 by peike
[考研] 311求调剂 +13 zchqwer 2026-04-01 15/750 2026-04-01 22:30 by 2026材料调剂
[考研] 化学308分调剂 +13 你好明天你好 2026-03-30 14/700 2026-04-01 16:19 by yanflower7133
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +3 redcom 2026-04-01 3/150 2026-04-01 15:44 by 443933501
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +4 yikeniu 2026-04-01 4/200 2026-04-01 14:06 by asdfzly
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 求0861交通运输专硕or材料专硕调剂 +4 勒布朗@ 2026-03-31 4/200 2026-04-01 09:54 by 一只好果子?
[考博] 26申博 +4 加油冲啊！ 2026-03-26 4/200 2026-03-31 22:42 by greychen00
[考研] 354求调剂 +3 lxb598 2026-03-31 4/200 2026-03-31 13:42 by sophie2180
[考研] 297求调剂 +17 田洪有 2026-03-26 18/900 2026-03-30 18:32 by nothing投稿中
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 342求调剂 +4 加油a李zs 2026-03-26 4/200 2026-03-30 16:39 by 晶体之美
[考研] 085701求调剂初试286分 +5 secret0328 2026-03-28 5/250 2026-03-30 12:54 by fangnagu
[考研] 283求调剂（080500） +14 A child 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:06 by 探123
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +4 邱gl 2026-03-26 7/350 2026-03-30 08:39 by 探123
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 265求调剂 +8 小木虫085600 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:16 by 无际的草原
[考研] 266求调剂 +11 阳阳哇塞 2026-03-27 12/600 2026-03-27 17:56 by yu221
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭