24小时热门版块排行榜    

查看: 841  |  回复: 7

Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助Western大神,我的pSmad怎么跑出来是三条呢???蓝瘦香菇==

我做成骨方向,是裂解C2C12细胞,然后用Western Blot分析细胞内pSmad1/5/8蛋白的含量。我计算了一下我跑胶的上样量大约45ug,然后按我们实验室前辈们摸索出来的经验,恒电压80V至跑出条带,然后换100V跑,整个过程大约90min。pSmad分子量大约在60kDa,我用的内参GAPDH在36kDa,于是转膜我用300mA转70min,感觉转的挺好的。接下来我用5%BSA室温封闭3h,然后加入1:1000的一抗4度孵育过夜,第二天吸出一抗用TBST洗三遍,每次5min,然后加入1:1000二抗室温孵育2h,然后用TBST洗三遍,每次5min,接下来就用ECL显色剂显色了,可是我跑了好几次感觉都不一样。。。
附件1是我上次跑的pSmad有一条,附件2是我这次跑的居然有3条。。。要哭了,有谁可以解释一下吗?

求助Western大神,我的pSmad怎么跑出来是三条呢???蓝瘦香菇==
1.PNG


求助Western大神,我的pSmad怎么跑出来是三条呢???蓝瘦香菇==-1
2.PNG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueskine

木虫 (正式写手)

2楼2017-03-12 15:17:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blueskine at 2017-03-12 15:17:59
一般是两条

那我三条里最下面那条是非特异性吸附的结果咯,还有没有别的解释呢

发自小木虫Android客户端
3楼2017-03-12 15:44:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueskine

木虫 (正式写手)

4楼2017-03-12 16:47:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by blueskine at 2017-03-12 16:47:08
10的胶吗

我用的8%的分离胶

发自小木虫Android客户端
5楼2017-03-12 22:59:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshine_WHL

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blueskine at 2017-03-12 15:17:59
一般是两条

我能不能换用pSmad1/5的一抗呀?

发自小木虫Android客户端
6楼2017-03-13 09:00:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueskine

木虫 (正式写手)

7楼2017-03-13 12:34:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueskine

木虫 (正式写手)

胶用的是10%的,跑出来是两条

发自小木虫Android客户端
8楼2017-03-13 12:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Sunshine_WHL 的主题更新
信息提示
请填处理意见