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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于诱导表达问题
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新虫 (初入文坛)

[求助] 关于诱导表达问题 已有6人参与

重组菌诱导表达后跑蛋白电泳，结果如下图。从左到右依次为maker、重组菌上清、重组菌沉淀、空菌上清和沉淀
重组载体为bl-21-pet-28a，带his-tag，诱导温度为16度，时间16小时左右
用16度诱导是看别人说低温诱导有助于蛋白的正确折叠，可是我这怎么全是包涵体
希望有人能帮我解惑！！！！！！！！！！！！

关于诱导表达问题
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1楼 2017-02-14 13:10:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

seascen2016

新虫 (小有名气)
这个跟蛋白本身性质有关，有的就容易产生包涵体，楼主可以试试少加点诱导剂再试试

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2楼2017-02-14 16:11:25
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-15 07:52:41
并不是所有的原核表达蛋白都会分泌表达的，有的就是会形成包涵体，看到你的上清中其实也含有一点目的蛋白，你可以将菌体多超声，多裂解，使其充分裂解，然后只要上清中的目的蛋白，也可以就这样按照包涵体蛋白的提取方法来做。
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怀挺！
3楼2017-02-14 16:28:56
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-14 16:11:25
这个跟蛋白本身性质有关，有的就容易产生包涵体，楼主可以试试少加点诱导剂再试试

我们实验室做诱导表达的诱导剂终浓度都是0.2mM，应该不算高吧
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5楼2017-02-14 16:50:53
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borrysa

金虫 (正式写手)
his容易有包涵体，正常，换个菌表达试试。

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10楼2017-02-15 02:44:35
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寥落星晨

木虫 (小有名气)
关于诱导表达问题-1

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21楼2017-02-16 13:37:46
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新虫 (初入文坛)
送红花一朵
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3楼: Originally posted by 栾栾silence at 2017-02-14 16:28:56
并不是所有的原核表达蛋白都会分泌表达的，有的就是会形成包涵体，看到你的上清中其实也含有一点目的蛋白，你可以将菌体多超声，多裂解，使其充分裂解，然后只要上清中的目的蛋白，也可以就这样按照包涵体蛋白的提取 ...

超声时间过长不是会使蛋白变性吗？这样不会影响酶活性的测定吗
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4楼2017-02-14 16:45:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
菌液的上清？怎么收蛋白啊
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6楼2017-02-14 16:54:00
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-14 16:54:00
菌液的上清？怎么收蛋白啊

做蛋白纯化

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7楼2017-02-14 17:12:27
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seascen2016

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 新人求帮助 at 2017-02-14 16:50:53
我们实验室做诱导表达的诱导剂终浓度都是0.2mM，应该不算高吧...

IPTG吗？我们实验室用100uM

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8楼2017-02-14 19:01:16
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-14 19:01:16
IPTG吗？我们实验室用100uM
...

嗯

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9楼2017-02-14 20:48:01
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