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新虫 (初入文坛)

[求助] 关于诱导表达问题 已有6人参与

重组菌诱导表达后跑蛋白电泳,结果如下图。从左到右依次为maker、重组菌上清、重组菌沉淀、空菌上清和沉淀
重组载体为bl-21-pet-28a,带his-tag,诱导温度为16度,时间16小时左右
用16度诱导是看别人说低温诱导有助于蛋白的正确折叠,可是我这怎么全是包涵体
希望有人能帮我解惑!!!!!!!!!!!!

关于诱导表达问题
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seascen2016

新虫 (小有名气)

这个跟蛋白本身性质有关,有的就容易产生包涵体,楼主可以试试少加点诱导剂再试试

发自小木虫Android客户端
2楼2017-02-14 16:11:25
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栾栾silence

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-02-15 07:52:41
并不是所有的原核表达蛋白都会分泌表达的,有的就是会形成包涵体,看到你的上清中其实也含有一点目的蛋白,你可以将菌体多超声,多裂解,使其充分裂解,然后只要上清中的目的蛋白,也可以就这样按照包涵体蛋白的提取方法来做。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

怀挺!
3楼2017-02-14 16:28:56
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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-14 16:11:25
这个跟蛋白本身性质有关,有的就容易产生包涵体,楼主可以试试少加点诱导剂再试试

我们实验室做诱导表达的诱导剂终浓度都是0.2mM,应该不算高吧
5楼2017-02-14 16:50:53
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borrysa

金虫 (正式写手)

his容易有包涵体,正常,换个菌表达试试。

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10楼2017-02-15 02:44:35
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寥落星晨

木虫 (小有名气)

21楼2017-02-16 13:37:46
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新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 栾栾silence at 2017-02-14 16:28:56
并不是所有的原核表达蛋白都会分泌表达的,有的就是会形成包涵体,看到你的上清中其实也含有一点目的蛋白,你可以将菌体多超声,多裂解,使其充分裂解,然后只要上清中的目的蛋白,也可以就这样按照包涵体蛋白的提取 ...

超声时间过长不是会使蛋白变性吗?这样不会影响酶活性的测定吗
4楼2017-02-14 16:45:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

菌液的上清?怎么收蛋白啊
6楼2017-02-14 16:54:00
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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2017-02-14 16:54:00
菌液的上清?怎么收蛋白啊

做蛋白纯化

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-02-14 17:12:27
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seascen2016

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 新人求帮助 at 2017-02-14 16:50:53
我们实验室做诱导表达的诱导剂终浓度都是0.2mM,应该不算高吧...

IPTG吗?我们实验室用100uM

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8楼2017-02-14 19:01:16
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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by seascen2016 at 2017-02-14 19:01:16
IPTG吗?我们实验室用100uM
...



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9楼2017-02-14 20:48:01
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