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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 求助各位关于IPTG诱导表达的一些问题
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小-罗-阳

金虫 (小有名气)

[求助] 求助各位关于IPTG诱导表达的一些问题 已有1人参与

最近在做iptg诱导表达实验，但是总是不成功，老师说可能是iptg用量的问题，我配制的iptg是24mg/ml的，锥形瓶中菌液40ml，如果想要使iptg终浓度为1mmol/L,那么我取400微升的iptg加入到锥形瓶中有什么问题吗？如果不是iptg的问题，那问题可能出在哪里？诱导温度，诱导时间方面有什么需要注意的吗，培养阶段要注意些什么？新手，不懂的好多，还请各位赐教！
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1楼 2015-05-08 23:06:34
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halfbeer

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这是啥？

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不成功是什么意思，蛋白没有诱导出来吗，还是电泳没跑出来，我之前做的用BL21诱导是37度，四个小时左右，浓度我记不清楚了

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现在我们能做的就是努力努力再努力
2楼2015-05-09 22:59:23
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小-罗-阳

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by halfbeer at 2015-05-09 22:59:23
不成功是什么意思，蛋白没有诱导出来吗，还是电泳没跑出来，我之前做的用BL21诱导是37度，四个小时左右，浓度我记不清楚了

蛋白诱导不出来，so电泳也没有条带，老师说我的iptg加太多了，但是按照我上面计算的用量没什么问题啊，实在是找不到问题所在了。
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3楼2015-05-10 15:52:31
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halfbeer

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3楼: Originally posted by 小-罗-阳 at 2015-05-10 15:52:31
蛋白诱导不出来，so电泳也没有条带，老师说我的iptg加太多了，但是按照我上面计算的用量没什么问题啊，实在是找不到问题所在了。...

你是取单菌落，液体过夜培养之后，第二天取过夜菌加到锥形瓶里摇到指数期，然后又加的iptg吗

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4楼2015-05-10 19:10:45
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小-罗-阳

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by halfbeer at 2015-05-10 19:10:45
你是取单菌落，液体过夜培养之后，第二天取过夜菌加到锥形瓶里摇到指数期，然后又加的iptg吗
...

是的，这样做没问题吧~
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5楼2015-05-11 15:12:35
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halfbeer

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小-罗-阳: 金币+11, ★有帮助 2015-05-13 08:11:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小-罗-阳 at 2015-05-11 15:12:35
是的，这样做没问题吧~...

对的，就是这么做的。那你是用的什么菌体表达的，如果是BL21的话，这么做应该没问题的。
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6楼2015-05-11 15:36:11
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