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小-罗-阳

金虫 (小有名气)

[求助] 求助各位关于IPTG诱导表达的一些问题已有1人参与

最近在做iptg诱导表达实验,但是总是不成功,老师说可能是iptg用量的问题,我配制的iptg是24mg/ml的,锥形瓶中菌液40ml,如果想要使iptg终浓度为1mmol/L,那么我取400微升的iptg加入到锥形瓶中有什么问题吗?如果不是iptg的问题,那问题可能出在哪里?诱导温度,诱导时间方面有什么需要注意的吗,培养阶段要注意些什么?新手,不懂的好多,还请各位赐教!
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halfbeer

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不成功是什么意思,蛋白没有诱导出来吗,还是电泳没跑出来,我之前做的用BL21诱导是37度,四个小时左右,浓度我记不清楚了

[ 发自小木虫客户端 ]
现在我们能做的就是努力努力再努力
2楼2015-05-09 22:59:23
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小-罗-阳

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by halfbeer at 2015-05-09 22:59:23
不成功是什么意思,蛋白没有诱导出来吗,还是电泳没跑出来,我之前做的用BL21诱导是37度,四个小时左右,浓度我记不清楚了

蛋白诱导不出来,so电泳也没有条带,老师说我的iptg加太多了,但是按照我上面计算的用量没什么问题啊,实在是找不到问题所在了。
3楼2015-05-10 15:52:31
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halfbeer

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3楼: Originally posted by 小-罗-阳 at 2015-05-10 15:52:31
蛋白诱导不出来,so电泳也没有条带,老师说我的iptg加太多了,但是按照我上面计算的用量没什么问题啊,实在是找不到问题所在了。...

你是取单菌落,液体过夜培养之后,第二天取过夜菌加到锥形瓶里摇到指数期,然后又加的iptg吗

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现在我们能做的就是努力努力再努力
4楼2015-05-10 19:10:45
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小-罗-阳

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by halfbeer at 2015-05-10 19:10:45
你是取单菌落,液体过夜培养之后,第二天取过夜菌加到锥形瓶里摇到指数期,然后又加的iptg吗
...

是的,这样做没问题吧~
5楼2015-05-11 15:12:35
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halfbeer

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小-罗-阳: 金币+11, 有帮助 2015-05-13 08:11:13
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小-罗-阳 at 2015-05-11 15:12:35
是的,这样做没问题吧~...

对的,就是这么做的。那你是用的什么菌体表达的,如果是BL21的话,这么做应该没问题的。
现在我们能做的就是努力努力再努力
6楼2015-05-11 15:36:11
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