| 查看: 3849 | 回复: 9 | |||
[交流]
PCR一直P不出产物，求各位大神一起帮我来找原因？ 已有6人参与
|
|
1. 模板是pcDNA3FLAG3-clk，是从其他实验室借来的，没有测序过，但师姐曾成功表达出蛋白。提质粒后，跑胶检测模板是是纯的。 2. 引物设计后找好几个师姐看过，没有问题 3. 阳性对照有条带 4. 模板浓度165ug/ml, 引物浓度25uM 25ul体系：5 X HF 5 3' Primer 1 5' Primer 1 10 X dNTP 1 Template 0.5 DMSO 1 Fusion 0.5 ddH2O 14.5 5. 目的基因1455bp, 延长时间1分30秒，循环30次[wmv][/wmv] 6. 附件图片 从左至右分别是 PCR sample, PCR sample 2, postive control, marker, template sample1 和 sample2 反应体系完全相同， 位于PCR 机子的位置不同 postive control 片段大小正确 请求各位大神帮着找找原因啊，做不出来已经快要疯掉了   user 2017-02-06 16hr 53min clk PCR.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 对称pcr条带很亮 不对称pcr没有条带
已经有2人回复
- 求助关于番茄TY3标记（P6-25）PCR检测所遇到的奇怪问题！！！
已经有6人回复
- 细菌16S测序 诡异的现象
已经有11人回复
- 双抗平板中长出了菌落，不知道是不是自己所要的重组菌
已经有5人回复
- 半年了，16S rDNA V3区PCR产物弥散，疑似比目的条带大一些些的杂带？
已经有7人回复
- 不对称pcr无目的条带
已经有1人回复
- PCR的小女孩~~~
已经有3人回复
- PCR产物的电泳条带出问题了！加了oading buffer和不加loading buffer的大小不一样！！
已经有12人回复
- 关于融合PCR的问题
已经有14人回复
- PCR的小女孩
已经有1人回复
- 两种引物的PCR电泳图，做了多次还是不解
已经有18人回复
- nested-PCR 怎样提高特异性
已经有0人回复
- 【求助/交流】PCR求助
已经有13人回复
- PCR求助
已经有2人回复
- 【纯水】卖火柴的小女孩（研究生版）
已经有32人回复
- PCR的小女孩---安涂生
已经有25人回复
- 【分享】【童话】【悲剧】【纪实】~~~《PCR的小女孩》精彩小说
已经有5人回复
- 【求助/交流】菌液PCR的经验
已经有6人回复
- 【求助/交流】PCR扩增怎么就没有条带！
已经有18人回复
yanlijuan
新虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2835.8
- 散金: 203
- 红花: 3
- 帖子: 322
- 在线: 128.9小时
- 虫号: 1471700
- 注册: 2011-11-01
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
2楼2017-02-08 15:51:44
3楼2017-02-08 15:54:47
yanlijuan
新虫 (正式写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2835.8
- 散金: 203
- 红花: 3
- 帖子: 322
- 在线: 128.9小时
- 虫号: 1471700
- 注册: 2011-11-01
- 性别: MM
- 专业: 环境微生物学
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-08 21:26:33
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-08 21:26:33
|
你去看你的用的酶的说明书，上面有一个dna模版做pcr适宜的浓度范围。从你的胶上看，dna浓度很大，而且有点降解了…你根据要求稀释一下dna，再试试！ 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-02-08 17:16:06
sweetcoffei
新虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 3075.4
- 红花: 2
- 帖子: 643
- 在线: 437小时
- 虫号: 2372661
- 注册: 2013-03-24
- 专业: 植物遗传学
5楼2017-02-09 09:08:33
yang1200500819
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4526.2
- 帖子: 653
- 在线: 59.4小时
- 虫号: 242357
- 注册: 2006-04-11
- 专业: 人类遗传学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
首先25ul体系模板10 ng足够了，其次退火可以试试参考温度上下三度以内的其它温度，再不行换gc buffer试试，最后一个小小建议，引物用五分之一足够了 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-02-09 09:46:59
1551099196
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 488.9
- 帖子: 9
- 在线: 23.5小时
- 虫号: 5251070
- 注册: 2016-11-17
- 性别: MM
- 专业: 免疫生物学
7楼2017-02-09 09:56:52
X小天T
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3233.5
- 散金: 1531
- 红花: 1
- 帖子: 411
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 1565701
- 注册: 2012-01-05
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
模板浓度降低到10ug加1ul（建议），引物浓度我们用的是10的，还有DMSO不加也试试，延长时间提高到两分钟，说明书说的酶活力是每分钟一千那是正常情况下，一般保守点适当提高延长时间 发自小木虫Android客户端 |
8楼2017-02-09 11:19:03
X小天T
金虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 3233.5
- 散金: 1531
- 红花: 1
- 帖子: 411
- 在线: 56.5小时
- 虫号: 1565701
- 注册: 2012-01-05
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
9楼2017-02-09 11:20:08
10楼2017-02-10 11:37:05
10