| 查看: 1370 | 回复: 0 | ||
tianhuijuan金虫 (小有名气)
|
[求助]
nested-PCR 怎样提高特异性
|
|
最近一直在做nest-PCR，产物特异性一直上不去。很是纠结：第一次p出的产物切胶回收后，稀释5倍取1微升做模板二次PCR,结果和第一次差不多，没有出现条带，仍是smear，几乎和第一次P的结果一样。 第一次P用的模板是提取的总RNA转录为双链DNA后，与Adaptor（之前实验室用的能成功的序列）链接。（除根据Adaptor设计的两条引物外的两条引物是由三个物种的同源性手动设计的。） 两次PCR都进行了退火温度和时间，及循环数的优化，也进行过TD-PCR（间隔1度 2度都试过 ），结果仍变化不大。 PS：模板在与Adaptor连接前用其他引物验证过，有条带。 1. 连接后有smear，应该算是连接成功了吧？ 2. 试剂盒Taq & Pfu 的都试过，结果是一样。那应该是引物的问题？但是不可能引物都出问题啊？ 恳求各位虫虫帮忙啦. |
回复此楼» 猜你喜欢
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
如何提高污泥沉降和浓缩性能
已经有8人回复
- 提高可逆反应的措施有哪些
已经有12人回复
- PCR产物经酶切电泳后所得的基因型与测序结果不一致，是何原因？该如何处理？
已经有10人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- [学习][英语][听力][我是 怎样 提高 英语听力]--希望对你有所启发
已经有1210人回复
- PCR产物测序结果
已经有8人回复
- 酵母菌落PCR的方法
已经有15人回复
- 荧光定量PCR cDNA怎么定量啊？
已经有12人回复
- PCR目的条带没跑出，但是跑出了特异性很强的单一条带，是什么原因呢？
已经有9人回复
- 【求助/交流】引物特异性PCR（SSP-PCR）检测SNP，是不是容易出现杂带呀
已经有11人回复
- 【求助】怎样提高蛋白质特异性吸附
已经有18人回复
- 【分享】提高PCR特异性的方法
已经有10人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人
