应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR一直P不出产物，求各位大神一起帮我来找原因？
51/1返回列表
查看: 3496  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

安静的啊啊啊

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR一直P不出产物，求各位大神一起帮我来找原因？ 已有6人参与

1. 模板是pcDNA3FLAG3-clk，是从其他实验室借来的，没有测序过，但师姐曾成功表达出蛋白。提质粒后，跑胶检测模板是是纯的。
  2. 引物设计后找好几个师姐看过，没有问题
  3. 阳性对照有条带
  4. 模板浓度165ug/ml, 引物浓度25uM
  25ul体系：5 X HF          5
                     3' Primer        1
                     5' Primer        1
                     10 X dNTP    1
                     Template       0.5
                     DMSO           1
                     Fusion           0.5
                     ddH2O          14.5
  5. 目的基因1455bp, 延长时间1分30秒，循环30次[wmv][/wmv]
  6. 附件图片 从左至右分别是 PCR sample, PCR sample 2,  postive control,  marker,  template
    sample1 和 sample2 反应体系完全相同， 位于PCR 机子的位置不同
    postive control 片段大小正确
请求各位大神帮着找找原因啊，做不出来已经快要疯掉了

PCR一直P不出产物，求各位大神一起帮我来找原因？
user 2017-02-06 16hr 53min clk PCR.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2017-02-08 15:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

X小天T

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
模板浓度降低到10ug加1ul（建议），引物浓度我们用的是10的，还有DMSO不加也试试，延长时间提高到两分钟，说明书说的酶活力是每分钟一千那是正常情况下，一般保守点适当提高延长时间

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-02-09 11:19:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

yanlijuan

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dna template 浓度太大了吧？

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2017-02-08 15:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安静的啊啊啊

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yanlijuan at 2017-02-08 15:51:44
dna template 浓度太大了吧？

你都用多少的啊？
回复此楼
3楼2017-02-08 15:54:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanlijuan

新虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-02-08 21:26:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静的啊啊啊 at 2017-02-08 15:54:47
你都用多少的啊？...

你去看你的用的酶的说明书，上面有一个dna模版做pcr适宜的浓度范围。从你的胶上看，dna浓度很大，而且有点降解了…你根据要求稀释一下dna，再试试！

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-02-08 17:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 292求调剂 +7 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 8/400 2026-03-26 00:22 by Dyhoer
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 333求调剂 +6 87639 2026-03-21 11/550 2026-03-25 16:17 by 87639
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 一志愿南昌大学，327分，材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭