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PCR一直P不出产物，求各位大神一起帮我来找原因？ 已有6人参与
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1. 模板是pcDNA3FLAG3-clk，是从其他实验室借来的，没有测序过，但师姐曾成功表达出蛋白。提质粒后，跑胶检测模板是是纯的。 2. 引物设计后找好几个师姐看过，没有问题 3. 阳性对照有条带 4. 模板浓度165ug/ml, 引物浓度25uM 25ul体系：5 X HF 5 3' Primer 1 5' Primer 1 10 X dNTP 1 Template 0.5 DMSO 1 Fusion 0.5 ddH2O 14.5 5. 目的基因1455bp, 延长时间1分30秒，循环30次[wmv][/wmv] 6. 附件图片 从左至右分别是 PCR sample, PCR sample 2, postive control, marker, template sample1 和 sample2 反应体系完全相同， 位于PCR 机子的位置不同 postive control 片段大小正确 请求各位大神帮着找找原因啊，做不出来已经快要疯掉了   user 2017-02-06 16hr 53min clk PCR.jpg |
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yanlijuan
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yanlijuan
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你去看你的用的酶的说明书，上面有一个dna模版做pcr适宜的浓度范围。从你的胶上看，dna浓度很大，而且有点降解了…你根据要求稀释一下dna，再试试！ 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-02-08 17:16:06
sweetcoffei
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yang1200500819
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首先25ul体系模板10 ng足够了，其次退火可以试试参考温度上下三度以内的其它温度，再不行换gc buffer试试，最后一个小小建议，引物用五分之一足够了 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-02-09 09:46:59
1551099196
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模板浓度降低到10ug加1ul（建议），引物浓度我们用的是10的，还有DMSO不加也试试，延长时间提高到两分钟，说明书说的酶活力是每分钟一千那是正常情况下，一般保守点适当提高延长时间 发自小木虫Android客户端 |
8楼2017-02-09 11:19:03
X小天T
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9楼2017-02-09 11:20:08
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