应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR扩增效率问题
171/2返回列表12下一页
查看: 7463  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] qPCR扩增效率问题 已有1人参与

之前查阅资料了解到要使用2-（deta,deta）Ct值分析方法，必须使目的基因与内参基因扩增效率一致。
因此采用cDNA梯度稀释法绘制标准曲线计算扩增效率。我有10个目的基因和1个内参，得到的结果从130%到190%不等，R方均大于0.99。
想问一下：1. 扩增效率这么高怎么办？
2. 另外扩增效率不一致的话，是不是只能用双标准曲线分析方法了？可是我有10个目的基因，只能一个一个弄嘛？急~

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-12-11 23:42:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-12 21:16:39
也不一定，你记录好应该也行，你有没有具体怎么稀释的比例，还有就是你用的什么设备。

稀释比例是10x，20x，50x，100x，500x。因为我感觉cDNA不像质粒那么好，所以没有按10倍的梯度，应该也可以的吧？
仪器使用的bio-rad CFX96

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-12-12 21:50:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)
300太高了吧，是不是构建的曲线有问题？我当时是180左右，然后pcr程序从三步法变成两步法降成了110左右。

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2016-12-25 17:30:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)
请各位高手解答…

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-12-11 23:43:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
是不是没有稀释好。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-12-12 15:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-12 15:06:49
是不是没有稀释好。

我是按照反转录盒最大量反转录的（5ug），然后从10倍稀释到了500倍。5个稀释倍数做的标准曲线。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-12-12 16:49:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
那你就稀释错了，只能10倍100倍1000倍这样稀释。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-12-12 21:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

许彦

木虫 (正式写手)
也不一定，你记录好应该也行，你有没有具体怎么稀释的比例，还有就是你用的什么设备。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-12-12 21:16:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ivy尘

新虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-26 07:43:55
说明引物特异性不好，优化引物浓度和退火温度，或者换引物

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-12-12 22:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Ivy尘

新虫 (正式写手)
稀释比例一般是5倍或者10倍等比稀释，你这梯度太奇怪了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-12-12 22:17:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Ivy尘 at 2016-12-12 22:17:44
稀释比例一般是5倍或者10倍等比稀释，你这梯度太奇怪了

第一次知道要做这个，以前都是直接2-（deta,deta）Ct算结果了。想问下相对定量到底需不需要做这个？有人说要有人说不要，我怕到时候投稿编辑问我要扩增效率的数据。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-12-12 23:49:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mochenmi 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 23jxep3nCNZb 2026-09-14 5/250 2026-09-17 03:50 by k06BKNblrGRH
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-17 03:40 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 02:50 by Tql5LQhh5rLK
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-17 02:38 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 7/350 2026-09-17 01:52 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:38 by Tql5LQhh5rLK
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-17 01:26 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 5/250 2026-09-16 21:39 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 18:37 by rRvxEj3zorCy
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 9/450 2026-09-16 18:36 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +8 两三岁ss 2026-09-14 8/400 2026-09-16 09:46 by 水士口
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:23 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭