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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR扩增效率问题
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by mochenmi at 2016-12-12 23:49:07
第一次知道要做这个，以前都是直接2-（deta,deta）Ct算结果了。想问下相对定量到底需不需要做这个？有人说要有人说不要，我怕到时候投稿编辑问我要扩增效率的数据。
...

主要是你这个稀释比例我不知道你怎么算的？我遇到很多计算错误， 还有相对定量我不熟悉，我就对绝对定量熟悉。

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11楼2016-12-13 10:12:45
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-13 10:12:45
主要是你这个稀释比例我不知道你怎么算的？我遇到很多计算错误， 还有相对定量我不熟悉，我就对绝对定量熟悉。
...

相对定量因为没有拷贝数，只能对稀释倍数取log值。比如稀释10倍定为1，100倍为0.1，然后再log作为横坐标

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12楼2016-12-13 12:50:11
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by mochenmi at 2016-12-13 12:50:11
相对定量因为没有拷贝数，只能对稀释倍数取log值。比如稀释10倍定为1，100倍为0.1，然后再log作为横坐标
...

那我觉得还是应该以绝对定量的来算。

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13楼2016-12-13 13:38:49
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-13 13:38:49
那我觉得还是应该以绝对定量的来算。
...

多谢，我再研究研究

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14楼2016-12-13 14:39:38
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大仙仙啊

新虫 (初入文坛)
我现在也出现扩增效率非常高，接近300，你是怎么使扩增效率降下来的？
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15楼2016-12-25 17:17:59
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
300太高了吧，是不是构建的曲线有问题？我当时是180左右，然后pcr程序从三步法变成两步法降成了110左右。

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16楼2016-12-25 17:30:43
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

等比稀释比较好，而且稀释比例小的话分辨率会不好，体系中存在抑制物会使扩增效率偏大，当然试剂、你的混样方式等也是有影响的
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17楼2016-12-26 15:43:46
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