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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR扩增效率问题
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] qPCR扩增效率问题 已有1人参与

之前查阅资料了解到要使用2-（deta,deta）Ct值分析方法，必须使目的基因与内参基因扩增效率一致。
因此采用cDNA梯度稀释法绘制标准曲线计算扩增效率。我有10个目的基因和1个内参，得到的结果从130%到190%不等，R方均大于0.99。
想问一下：1. 扩增效率这么高怎么办？
2. 另外扩增效率不一致的话，是不是只能用双标准曲线分析方法了？可是我有10个目的基因，只能一个一个弄嘛？急~

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1楼 2016-12-11 23:42:57
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许彦

木虫 (正式写手)
也不一定，你记录好应该也行，你有没有具体怎么稀释的比例，还有就是你用的什么设备。

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6楼2016-12-12 21:16:39
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
请各位高手解答…

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2楼2016-12-11 23:43:50
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许彦

木虫 (正式写手)
是不是没有稀释好。

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3楼2016-12-12 15:06:49
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mochenmi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-12 15:06:49
是不是没有稀释好。

我是按照反转录盒最大量反转录的（5ug），然后从10倍稀释到了500倍。5个稀释倍数做的标准曲线。

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4楼2016-12-12 16:49:24
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