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mochenmi铜虫 (小有名气)
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qPCR扩增效率问题 已有1人参与
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之前查阅资料了解到要使用2-（deta,deta）Ct值分析方法，必须使目的基因与内参基因扩增效率一致。 因此采用cDNA梯度稀释法绘制标准曲线计算扩增效率。我有10个目的基因和1个内参，得到的结果从130%到190%不等，R方均大于0.99。 想问一下：1. 扩增效率这么高怎么办？ 2. 另外扩增效率不一致的话，是不是只能用双标准曲线分析方法了？可是我有10个目的基因，只能一个一个弄嘛？急~ 发自小木虫IOS客户端 |
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稀释比例是10x，20x，50x，100x，500x。因为我感觉cDNA不像质粒那么好，所以没有按10倍的梯度，应该也可以的吧？ 仪器使用的bio-rad CFX96 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2016-12-12 21:50:28
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第一次知道要做这个，以前都是直接2-（deta,deta）Ct算结果了。想问下相对定量到底需不需要做这个？有人说要有人说不要，我怕到时候投稿编辑问我要扩增效率的数据。 发自小木虫IOS客户端 |
10楼2016-12-12 23:49:07
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