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mochenmi

铜虫 (小有名气)

[求助] qPCR扩增效率问题 已有1人参与

之前查阅资料了解到要使用2-(deta,deta)Ct值分析方法,必须使目的基因与内参基因扩增效率一致。
因此采用cDNA梯度稀释法绘制标准曲线计算扩增效率。我有10个目的基因和1个内参,得到的结果从130%到190%不等,R方均大于0.99。
想问一下:1. 扩增效率这么高怎么办?
2. 另外扩增效率不一致的话,是不是只能用双标准曲线分析方法了?可是我有10个目的基因,只能一个一个弄嘛?急~

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Ivy尘

新虫 (正式写手)

稀释比例一般是5倍或者10倍等比稀释,你这梯度太奇怪了

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9楼2016-12-12 22:17:44
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

2楼2016-12-11 23:43:50
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许彦

木虫 (正式写手)

3楼2016-12-12 15:06:49
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mochenmi

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 许彦 at 2016-12-12 15:06:49
是不是没有稀释好。

我是按照反转录盒最大量反转录的(5ug),然后从10倍稀释到了500倍。5个稀释倍数做的标准曲线。

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4楼2016-12-12 16:49:24
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