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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切连接都是假阳性
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qwqwqwqwq

新虫 (初入文坛)

[交流] 双酶切连接都是假阳性 已有6人参与

我pcr产物进行双酶切后连接到载体上，长得菌全是假阳性。pcr产物没有纯化过，是不是会有影响？
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1楼 2016-08-21 21:03:32
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矜天

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
6楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-28 16:30:47
请问纯化后260/230很低对连接会有影响吗?...

在连接中我都没关注过这个值，我认为纯化试剂盒OK就没事

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7楼2016-11-29 00:02:43
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柳柳好

新虫 (初入文坛)
★
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没有P出产物？酶切位点，载体过多？

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2楼2016-08-22 11:04:08
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
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会有影响，尤其做连接时，两种片段的纯度及比例对连接效率有很大影响。
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3楼2016-08-22 15:01:10
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矜天

木虫 (正式写手)
★
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PCR完纯了之后，酶切，再纯一次，算好比例，连接，一般都不会出问题。你省略太多了
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4楼2016-08-23 10:59:05
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