应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切连接都是假阳性
91/1返回列表
查看: 3354  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qwqwqwqwq

新虫 (初入文坛)

[交流] 双酶切连接都是假阳性 已有6人参与

我pcr产物进行双酶切后连接到载体上，长得菌全是假阳性。pcr产物没有纯化过，是不是会有影响？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-08-21 21:03:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳柳好

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没有P出产物？酶切位点，载体过多？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-08-22 11:04:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会有影响，尤其做连接时，两种片段的纯度及比例对连接效率有很大影响。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-08-22 15:01:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
PCR完纯了之后，酶切，再纯一次，算好比例，连接，一般都不会出问题。你省略太多了
赞一下 回复此楼
4楼2016-08-23 10:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pooh0216

铜虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不纯化肯定是有影响的。假阳性是因为背景太高了吗？你可以做个无片段转化的对照看看。你可以试试vazyme的克隆盒子啊，就不用酶切这么麻烦了
赞一下 回复此楼
5楼2016-08-23 11:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 矜天 at 2016-08-23 10:59:05
PCR完纯了之后，酶切，再纯一次，算好比例，连接，一般都不会出问题。你省略太多了

请问纯化后260/230很低对连接会有影响吗?
赞一下 回复此楼
6楼2016-11-28 16:30:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

矜天

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by xms0422 at 2016-11-28 16:30:47
请问纯化后260/230很低对连接会有影响吗?...

在连接中我都没关注过这个值，我认为纯化试剂盒OK就没事

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-11-29 00:02:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xms0422

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 矜天 at 2016-11-29 00:02:43
在连接中我都没关注过这个值，我认为纯化试剂盒OK就没事
...

我要连接一个3000bp的片段，一直连不上，用的是10ul体系，16度过夜，质量比1：10 请问你知道什么改进的方法吗？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-11-29 08:12:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘟嘟教授

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能，但也有其他方面的原因，您可以咨询南京诺唯赞技术支持，他们对亚克隆技术经验蛮丰富的，好像产品卖的也不错呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2016-11-29 13:53:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qwqwqwqwq 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-29 16:49 by zICmwzsBXjbN
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 16:31 by 时光旅行者
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +3 tannykie 2026-08-29 3/150 2026-08-29 16:18 by manplx
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭