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[求助]
构建好的质粒转入BL21,卡娜抗性平板转化菌落多，且菌液pcr均为假阳性
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求助，第一次做克隆表达，一直遇到问题，希望有人能帮帮我， 目的条带测序为2300多先连接到Takara的pmd-18T，验证后提取质粒，与pet28a双酶切后酶连，双酶切用的是takara的xho1和NCOL1，酶切后跑电泳会有大于4500小于质粒的条带，mark用的是Takara的250bp DNA ladder，根据割胶回收大小在2300的条带，先转入到DH5a，这一步转化的kn抗性平板也是菌落长的多且多为假阳性，经过多次挑取单菌落得到5株阳性菌株，质粒pcr为阳性，质粒电泳只看到单一条带，但双酶切目的条带较淡；质粒做过1微升，0.3微升，0.1微升，1微升质粒稀释30倍和50倍后各区1微升做转化；1微升，0.3微升，0.1微升的转化平板菌落较多，稀释30倍和50倍的转化平板菌落较少但菌液pcr仍然都是假阳性（多次挑菌落验证）。希望大家能告诉我哪一步出问题了改怎么解决？ |
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2楼2015-08-27 20:36:43
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