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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切连接都是假阳性
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qwqwqwqwq

新虫 (初入文坛)

[交流] 双酶切连接都是假阳性 已有6人参与

我pcr产物进行双酶切后连接到载体上，长得菌全是假阳性。pcr产物没有纯化过，是不是会有影响？
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1楼 2016-08-21 21:03:32
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
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会有影响，尤其做连接时，两种片段的纯度及比例对连接效率有很大影响。
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3楼2016-08-22 15:01:10
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柳柳好

新虫 (初入文坛)
★
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没有P出产物？酶切位点，载体过多？

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-08-22 11:04:08
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矜天

木虫 (正式写手)
★
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PCR完纯了之后，酶切，再纯一次，算好比例，连接，一般都不会出问题。你省略太多了
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4楼2016-08-23 10:59:05
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pooh0216

铜虫 (著名写手)
★
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不纯化肯定是有影响的。假阳性是因为背景太高了吗？你可以做个无片段转化的对照看看。你可以试试vazyme的克隆盒子啊，就不用酶切这么麻烦了
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5楼2016-08-23 11:16:21
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