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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 重组质粒的提取
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15729217609

铁虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒的提取 已有3人参与

为什么我提取出来的重组质粒上面会有那么亮的条带，而我的质粒条带不亮？按分子量大小下面那个暗的浅条带是我的重组质粒条带。上面为什么会有那些不知道什么条带？谁知道可以解答一下吗？谢谢

重组质粒的提取


@biostar2009 发自小木虫Android客户端
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笑一笑没什么事过不了！
1楼 2016-06-17 18:44:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-06-18 17:02:55
xn8008: 应助指数+1 2016-06-19 07:53:23
引用回帖:
4楼: Originally posted by 15729217609 at 2016-06-18 12:41:02
中间那条带不应该那么亮？我怀疑那条亮带是不是基因组？或者会不会是我质粒提取时溶液1中的RNA酶失活了，不起作用了？那条亮带会不会是RNA？谢谢
...

我感觉rna条带不会那么清晰漂亮，毕竟提取质粒来说，rna被降解的可能性比较大的，要知道专门抽提rna也很难得到你这样漂亮的条带的，通常质粒抽提污染的rna大部分降解，在电泳时会在最前端呈弥散状。而基因组的条带应该比这个大一些吧，感觉最好还是把质粒做个酶切，结果就显而易见了，单纯看质粒得不出什么明确结论，祝好！

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
6楼2016-06-18 16:01:00
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孤鸿飘渺影

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般会有三条带，从上向下一次为：开环（单链断开），线性化（双链断开），负超螺旋（环状）。理论大小应该是第二条带所在的位置。图中负超螺旋量很少，有点不正常。可能你提的质粒有问题。
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7楼2016-06-19 20:11:21
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利，文章多多。 2016-06-17 21:55:00
xn8008: 应助指数+1 2016-06-19 07:53:09
如果是没有酶切的质粒，这样的现象也正常吧，这三条带应该都是你的质粒，只不过处于不同的形态，在电泳检测的时候就会出现不同的迁移，当你进行酶切后质粒处于同一状态，就不会这样了，祝好！

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2楼2016-06-17 19:25:09
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masterboyama

铁虫 (著名写手)
那么亮的带有可能是rna，跑胶前可以做个去rna.

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3楼2016-06-17 19:30:20
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15729217609

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-17 19:25:09
如果是没有酶切的质粒，这样的现象也正常吧，这三条带应该都是你的质粒，只不过处于不同的形态，在电泳检测的时候就会出现不同的迁移，当你进行酶切后质粒处于同一状态，就不会这样了，祝好！
...

中间那条带不应该那么亮？我怀疑那条亮带是不是基因组？或者会不会是我质粒提取时溶液1中的RNA酶失活了，不起作用了？那条亮带会不会是RNA？谢谢

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笑一笑没什么事过不了！
4楼2016-06-18 12:41:02
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15729217609

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by masterboyama at 2016-06-17 19:30:20
那么亮的带有可能是rna，跑胶前可以做个去rna.

我也怀疑是RNA

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5楼2016-06-18 12:41:52
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草溪河

铁虫 (著名写手)
质粒只有酶切成单链才可以看分子大小吧？一般情况下，提的质粒跑胶出现三条带很正常

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8楼2016-06-19 21:32:28
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15729217609

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 孤鸿飘渺影 at 2016-06-19 20:11:21
一般会有三条带，从上向下一次为：开环（单链断开），线性化（双链断开），负超螺旋（环状）。理论大小应该是第二条带所在的位置。图中负超螺旋量很少，有点不正常。可能你提的质粒有问题。

但是，第二条分子量比这个重组质粒DNA理论上分子量要大？这样正确吗？

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9楼2016-06-20 09:45:43
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sayen

银虫 (小有名气)
你没说质粒理论大小是多少

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10楼2016-06-20 10:07:03
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