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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 重组质粒的提取
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15729217609

铁虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by sayen at 2016-06-20 10:07:03
你没说质粒理论大小是多少

这是六个不同的重组质粒，分子量在6600-6700bp之间，右边MARK最上边那条带是5000bp

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11楼2016-06-20 10:51:12
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孤鸿飘渺影

新虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 15729217609 at 2016-06-20 09:45:43
但是，第二条分子量比这个重组质粒DNA理论上分子量要大？这样正确吗？
...

不正确。如果你图中第二条带是线性化，那么它代表的就是理论大小。但提质粒时线性化条带不会这么亮。
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12楼2016-06-20 13:40:56
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孤鸿飘渺影

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by 孤鸿飘渺影 at 2016-06-20 13:40:56
不正确。如果你图中第二条带是线性化，那么它代表的就是理论大小。但提质粒时线性化条带不会这么亮。...

很可能你第二条带就是超螺旋，第一条带是开环，第三条带不清楚。
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13楼2016-06-20 13:43:54
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)
应该没问题，第二条亮的条带是超螺旋的质粒

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14楼2016-06-20 21:13:43
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

质粒提取的一点问题都没有，很漂亮，好几条带很正常，好多人解释的也很正确，不要再纠结质粒的大小了，几种形式会同时出现，酶切以后一目了然，这时候再看大小才能知道对不对，然后再测序鉴定

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15楼2016-06-20 22:54:16
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15729217609

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-06-17 19:25:09
如果是没有酶切的质粒，这样的现象也正常吧，这三条带应该都是你的质粒，只不过处于不同的形态，在电泳检测的时候就会出现不同的迁移，当你进行酶切后质粒处于同一状态，就不会这样了，祝好！
...

这个问题弄明白了，是试剂盒原因，我换了一个试剂盒提取同一菌液中的质粒，就是很正常的了。超螺旋质粒条带最亮，上面两条线性和开环质粒条带就很浅！谢谢大家的分析！

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16楼2016-06-25 22:38:21
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