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南拳奶爸

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 593.1
帖子: 43
在线: 20.5小时
虫号: 2216374
注册: 2012-12-31
性别: GG
专业: 水产生物免疫学与病害控制

[求助] 如何提高重组质粒在宿主内存在时间，即提高质粒稳定性

小弟最近做原核转基因，电转化细菌在LB AMP培养基中培养7小时后（菌液浑浊），通过PCR、跑胶发现重组质粒丢失。而后通过提取质粒，质粒PCR，跑胶，发现无重组质粒的条带。
小弟求教如何降低质粒的丢失率，延长重组质粒在宿主内存在时间。
注：载体质粒为pet32a ，宿主菌也不能更换。
希望大牛赐教啊

[ Last edited by 南拳奶爸 on 2013-10-31 at 16:42 ]

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1楼 2013-10-31 16:36:51

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大鹏鸟100

木虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
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红花: 5
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在线: 260.4小时
虫号: 123455
注册: 2005-12-05
性别: GG
专业: 肿瘤复发与转移

【答案】应助回帖

应该不会啊，一般用的感受态菌都是基因工程改造过的，已经是延长DNA在其体内的存在时间了。
考虑：1、改变一下转化方法，用普通的热休克法。
2、怀疑你培养基中的抗生素是否有效
3、如果是要大量提取质粒，还是先划个平板吧，挑菌，1ml，200ml，逐步扩大，转化完了就扩大培养，质量不好。

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2楼2013-11-02 15:06:44

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