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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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南拳奶爸

金虫 (初入文坛)

[求助] 如何提高重组质粒在宿主内存在时间,即提高质粒稳定性

小弟最近做原核转基因,电转化细菌在LB AMP培养基中培养7小时后(菌液浑浊),通过PCR、跑胶发现重组质粒丢失。而后通过提取质粒,质粒PCR,跑胶,发现无重组质粒的条带。
小弟求教 如何降低质粒的丢失率 ,延长重组质粒在宿主内存在时间。
注:载体质粒为pet32a ,宿主菌也不能更换。
希望大牛赐教啊

[ Last edited by 南拳奶爸 on 2013-10-31 at 16:42 ]
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大鹏鸟100

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该不会啊,一般用的感受态菌都是基因工程改造过的,已经是延长DNA在其体内的存在时间了。
考虑:1、改变一下转化方法,用普通的热休克法。
2、怀疑你培养基中的抗生素是否有效
3、如果是要大量提取质粒,还是先划个平板吧,挑菌,1ml,200ml,逐步扩大,转化完了就扩大培养,质量不好。
2楼2013-11-02 15:06:44
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