24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 602  |  回复: 1

南拳奶爸

金虫 (初入文坛)

[求助] 如何提高重组质粒在宿主内存在时间,即提高质粒稳定性

小弟最近做原核转基因,电转化细菌在LB AMP培养基中培养7小时后(菌液浑浊),通过PCR、跑胶发现重组质粒丢失。而后通过提取质粒,质粒PCR,跑胶,发现无重组质粒的条带。
小弟求教 如何降低质粒的丢失率 ,延长重组质粒在宿主内存在时间。
注:载体质粒为pet32a ,宿主菌也不能更换。
希望大牛赐教啊

[ Last edited by 南拳奶爸 on 2013-10-31 at 16:42 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大鹏鸟100

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该不会啊,一般用的感受态菌都是基因工程改造过的,已经是延长DNA在其体内的存在时间了。
考虑:1、改变一下转化方法,用普通的热休克法。
2、怀疑你培养基中的抗生素是否有效
3、如果是要大量提取质粒,还是先划个平板吧,挑菌,1ml,200ml,逐步扩大,转化完了就扩大培养,质量不好。
2楼2013-11-02 15:06:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 南拳奶爸 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600,材料与化工321分,求调剂 +13 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-04-02 10:48 by sanrepian
[考研] 316求调剂 +11 舟自梗 2026-04-01 12/600 2026-04-02 10:12 by 不吃魚的貓
[考研] 考研调剂 +12 Amber00 2026-03-31 12/600 2026-04-02 09:04 by sanrepian
[考研] 一志愿安徽大学计算机科学与技术学硕,331分求调剂 +5 蒋昌鹏qtj 2026-04-01 5/250 2026-04-02 08:10 by fxue1114
[考研] 化学工程专硕324分,一志愿中国矿业大学求调剂 +7 耿耿1314 2026-04-01 7/350 2026-04-02 07:40 by 尚水阁主
[考研] 336求调剂 +5 kiyy 2026-04-01 5/250 2026-04-02 07:14 by chixmc
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-01 12/600 2026-04-02 00:21 by 百秒光年
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 一志愿西安交大材料学硕(英一数二)347,求调剂到高分子/材料相关专业 +7 zju51 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:35 by CFQZAFU
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:24 by 无际的草原
[考研] 350求调剂 +7 阿佳~ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 16:12 by yanflower7133
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ,080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-31 11/550 2026-04-01 09:43 by xiayizhi
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +5 双马尾痞老板2 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:04 by oooqiao
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 08工科求调剂286 +5 tgs_001 2026-03-28 5/250 2026-03-31 08:18 by 一只好果子?
[考研] 本科双非材料,跨考一志愿华电085801电气,283求调剂,任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
信息提示
请填处理意见