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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 第一次做荧光PCR，一直失败
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5566589

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次做荧光PCR，一直失败 已有5人参与

我们组只有我一个做荧光PCR的，第一次做空白的水也有扩增曲线，如图。。。求问是因为引物有二聚体吗
Amplification Plot.jpg
Melt Curve.jpg

第一次做荧光PCR，一直失败
Amplification Plot.jpg


第一次做荧光PCR，一直失败-1
Melt Curve.jpg
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1楼 2016-04-27 19:56:40
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

5566589

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-27 21:23:29
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水，如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有，引物特异性不高，建议重设计引物

谢谢谢谢，水就是自带的，我再换个引物试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2016-04-27 21:41:58
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XLK2011

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by lianfeng1107 at 2016-04-29 16:46:01
说到水，强烈推荐TAKARA公司 的Dilution buffer，荧光定量神水。

这个dilution buffer是单独卖的吗？

发自小木虫Android客户端
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15楼2016-05-01 10:44:29
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普通回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水，如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有，引物特异性不高，建议重设计引物
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2楼2016-04-27 21:23:29
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z631535213

木虫 (正式写手)
用的ROX还是什么啊，学习中

发自小木虫IOS客户端
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4楼2016-04-27 23:08:19
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5566589

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by z631535213 at 2016-04-27 23:08:19
用的ROX还是什么啊，学习中

SYBR
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5楼2016-04-28 10:24:38
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做荧光定量技术服务

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6楼2016-04-28 13:38:19
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许欧阳紫儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有引物二聚体，引物要重新设计，水也有曲线的话一般是气融胶污染，建议枪专用

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7楼2016-04-28 14:35:47
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许彦

木虫 (正式写手)
实验室环境有问题吧，是不是实验室做过类似的普通pcr有过开盖。

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8楼2016-04-28 15:59:58
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许彦

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by z631535213 at 2016-04-27 23:08:19
用的ROX还是什么啊，学习中

这个机器应该是7500，rox是7500的校准荧光。

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9楼2016-04-28 16:00:34
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的是千倍稀释的SYBR，这个不常用的呀，一般都要设计一条荧光引物如ROX，FAM，VIC。用SYBR都不准的，你阴性CT22，那阳新多少，15左右吗？
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采菊东篱下，悠然见南山。
10楼2016-04-28 16:01:19
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