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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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5566589

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 第一次做荧光PCR,一直失败 已有5人参与

我们组只有我一个做荧光PCR的,第一次做空白的水也有扩增曲线,如图。。。求问是因为引物有二聚体吗
Amplification Plot.jpg
Melt Curve.jpg

第一次做荧光PCR,一直失败
Amplification Plot.jpg


第一次做荧光PCR,一直失败-1
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781055707

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你用的是千倍稀释的SYBR,这个不常用的呀,一般都要设计一条荧光引物如ROX,FAM,VIC。用SYBR都不准的,你阴性CT22,那阳新多少,15左右吗?
采菊东篱下,悠然见南山。
10楼2016-04-28 16:01:19
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卡维斯

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水,如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有,引物特异性不高,建议重设计引物
2楼2016-04-27 21:23:29
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5566589

主管区长

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-27 21:23:29
水最好用荧光染料试剂盒中自带的Rnase-free的水,如果有污染也会出现这样的情况。另外溶解曲线单峰型没有,引物特异性不高,建议重设计引物

谢谢谢谢,水就是自带的,我再换个引物试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2016-04-27 21:41:58
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z631535213

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

用的ROX还是什么啊,学习中

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-04-27 23:08:19
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