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超级马力

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做原核表达,蛋白全在在包涵体中,优化了条件也不行,怎么办? 已有1人参与

最近用Rosetta菌株表达一个植物蛋白,使用的是pET28a载体,18度诱导过夜全在包涵体中,通过纯化上清,只能拿到很少的蛋白。后来在16度条件下优化条件,包括诱导剂的量,诱导时间,加葡萄糖或乙醇。但是没有效果。请问有经验的高手有什么好的建议吗?
PS:图片中是16度优化条件的结果。蛋白大小大概是50kDa。

最近做原核表达,蛋白全在在包涵体中,优化了条件也不行,怎么办?
Administrator 2016-04-22 01hr 25min.jpg


最近做原核表达,蛋白全在在包涵体中,优化了条件也不行,怎么办?-1
Administrator 2016-04-22 01hr 27min.jpg
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fiship

新虫 (初入文坛)

加个gst标签之类的蛋白帮助一下,但是先打个预防针,不是所有蛋白都能可容表达,如果可行可以考虑复性

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2楼2016-04-23 16:21:39
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
超级马力: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-04-25 10:12:45
加标签是可以,但是我们通常可以尝试下其他表达载体,比如换一些启动子较弱的载体

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
3楼2016-04-23 21:23:28
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star013

新虫 (知名作家)


我们可以帮您做表达纯化

发自小木虫Android客户端
4楼2016-04-24 10:31:47
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空空如也的左

新虫 (初入文坛)

后来怎么样了啊楼主....我加0.2%的葡萄糖然后蛋白几乎诱导不出来,蛋白表达量和我不加葡萄糖的时候的上清含量差不多
5楼2018-06-15 15:56:50
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