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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 最近做原核表达，蛋白全在在包涵体中，优化了条件也不行，怎么办？
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超级马力

新虫 (小有名气)

[求助] 最近做原核表达，蛋白全在在包涵体中，优化了条件也不行，怎么办？ 已有1人参与

最近用Rosetta菌株表达一个植物蛋白，使用的是pET28a载体，18度诱导过夜全在包涵体中，通过纯化上清，只能拿到很少的蛋白。后来在16度条件下优化条件，包括诱导剂的量，诱导时间，加葡萄糖或乙醇。但是没有效果。请问有经验的高手有什么好的建议吗？
PS：图片中是16度优化条件的结果。蛋白大小大概是50kDa。

最近做原核表达，蛋白全在在包涵体中，优化了条件也不行，怎么办？
Administrator 2016-04-22 01hr 25min.jpg


最近做原核表达，蛋白全在在包涵体中，优化了条件也不行，怎么办？-1
Administrator 2016-04-22 01hr 27min.jpg
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1楼 2016-04-23 15:21:09
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fiship

新虫 (初入文坛)
加个gst标签之类的蛋白帮助一下，但是先打个预防针，不是所有蛋白都能可容表达，如果可行可以考虑复性

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2楼2016-04-23 16:21:39
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
超级马力: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-04-25 10:12:45
加标签是可以，但是我们通常可以尝试下其他表达载体，比如换一些启动子较弱的载体

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
3楼2016-04-23 21:23:28
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以帮您做表达纯化

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4楼2016-04-24 10:31:47
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空空如也的左

新虫 (初入文坛)
后来怎么样了啊楼主....我加0.2%的葡萄糖然后蛋白几乎诱导不出来,蛋白表达量和我不加葡萄糖的时候的上清含量差不多
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5楼2018-06-15 15:56:50
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