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关于原核表达肠激酶切，做了两次了都没切开。 已有2人参与
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最近在用PET30a表达了一个蛋白，到了肠激酶酶切这一步卡住了，切了两次了都没切开。 目的蛋白50KDa左右，切除后应该是43kDa左右（His标签大概7kDa），但是蛋白电泳图跟对照和marker都一致在50。 我的蛋白液100ml左右，用了两次100ul的肠激酶了（总共200ul），酶切条件是22°，16h。 各位帮忙分析下原因，谢谢咯。 |
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