应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒不表达
81/1返回列表
查看: 2381  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

笔笔小结

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒不表达 已有3人参与

表达载体是pET28a，在-20冰箱放了两年，拿出来做表达，SDS-PAGE没有目的条带出来。两年前表达量挺高的，这是什么原因呢，按理说质粒放-20两年应该没问题的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-22 15:02:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

永恒_99

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-03-24 07:32:22
连接目的基因的载体需要保存在DH5a中，需要提出质粒重新转化进BL21中。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-03-22 16:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笔笔小结

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 永恒_99 at 2016-03-22 16:18:17
连接目的基因的载体需要保存在DH5a中，需要提出质粒重新转化进BL21中。

DH5a感受态细胞不是用于质粒扩增的吗？你的意思是重组质粒先转化DH5a，提质粒后再转化BL21DE3中？可是这样做的原因是？请指教
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-23 20:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haijun海军11

新虫 (小有名气)
可能是中间某步操作有问题吧，一般这种问题再重复一次试试，载体-20应该不会有问题

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
大家一起加油
4楼2016-03-24 00:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
将两年前的质粒重新转化DH5a提一次，然后转化BL21再行诱导表达
赞一下(1人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2016-03-24 01:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你提出质粒，做过PCR，看看条等，在吧这个质粒重组到BL21(DE3).
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
6楼2016-03-24 14:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笔笔小结

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2016-03-24 01:59:41
将两年前的质粒重新转化DH5a提一次，然后转化BL21再行诱导表达

谢谢
回复此楼
7楼2016-03-28 20:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RCEESTHZ

铁虫 (初入文坛)
老师您好，我的质粒是puc19-EGFP，我发现转后的大肠杆菌在固体培养基中传几代后，EGFP就不表达了，非得等稳定期又开始表达了
赞一下 回复此楼
8楼2024-07-10 13:29:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 笔笔小结 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂院校信息 +4 CX 330 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:48 by ms629
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 一志愿南大，0703化学，分数336，求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭