应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 关于重组质粒，对表达载体的前处理
41/1返回列表
查看: 993  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sansejin20

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于重组质粒，对表达载体的前处理 已有1人参与

做重组质粒，对表达载体进行双酶切后又做PCR纯化，纯化这步有必要做吗？因为重复了两遍都没找出重组成功的，现在是找方法上的原因，对片段是进行双酶切后切胶回收，这个应该没什么问题，就是对表达载体的PCR纯化这步，我是怕把双酶切露出的粘性末端破坏了，所以才连不上，求助啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
食品研究生，何去何从
1楼 2015-03-26 10:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
sansejin20: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-03-30 15:41:59
应该不是纯化的原因，表达载体酶切后不纯化的话，你的连接体系中就会有残留的酶切下来的片段，这样假阳性的克隆会很多，建议你在目的片段和表达载体的比例上做调整，连接之前对这两个片段再跑一次胶看看大小是否正确，同时也要注意你的感受态是否是新鲜制备并有活性的，另外，你最好做一个只加表达载体不加目的片段的对照，一一排除你失败的原因
赞一下 回复此楼
医学&统计学
2楼2015-03-29 17:18:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小cool

金虫 (正式写手)
表达载体酶切后要切胶回收的，不能pcr回收

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-29 21:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sansejin20

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小cool at 2015-03-29 21:11:01
表达载体酶切后要切胶回收的，不能pcr回收

谢谢
回复此楼
食品研究生，何去何从
4楼2015-04-13 09:32:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sansejin20 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭