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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 空质粒的存放问题
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weiranqq

新虫 (初入文坛)

[求助] 空质粒的存放问题 已有3人参与

我这里有一些一个月前提的空质粒，一直于-20摄氏度存放，准备双酶切后用于构建表达载体，请问这些质粒可用吗？会影响酶切吗？
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1楼 2015-03-01 15:16:51
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-02 19:40:21
如果用TER保存的，就不会。
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2楼2015-03-01 16:19:50
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-02 19:40:29
一般是不会有什么问题的。可以先跑个电泳，看看有没有降解。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-03-01 16:19:54
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robinletter

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weiranqq: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-02 09:25:28
用质粒小提试剂盒，从大肠菌提取质粒，最后一步用试剂盒的Eluent Buffer从离心柱上洗下质粒于灭菌的1.5mL离心管，然后置于-20度保存，避免多次反复冻融。这样保存的质粒，几年内都可以用，没有任何问题。
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4楼2015-03-01 22:25:10
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-01 16:19:50
如果用TER保存的，就不会。

TER是什么？感觉水溶解的一年半载也没问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
5楼2015-03-01 22:38:39
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weiranqq

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by robinletter at 2015-03-01 22:25:10
用质粒小提试剂盒，从大肠菌提取质粒，最后一步用试剂盒的Eluent Buffer从离心柱上洗下质粒于灭菌的1.5mL离心管，然后置于-20度保存，避免多次反复冻融。这样保存的质粒，几年内都可以用，没有任何问题。

我是用试剂盒提取的质粒，但是用超纯水洗脱的，有影响吗？
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6楼2015-03-02 09:24:35
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2015-03-01 22:38:39
TER是什么？感觉水溶解的一年半载也没问题
...

ter是te缓冲液加rna酶。这样保存时间久一些。

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2015-03-02 09:37:28
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)
用超纯水溶解的话，一个月 -20度 完全没问题，我之前做个一个 质粒酶切完后的产物存放了一个半月，然后做连接照样能连上，关键是你的连接比例问题，加上感受态的转化效率
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8楼2015-03-04 09:11:42
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ltf329395464

金虫 (初入文坛)
只要水的等级够，1年半载没问题，TE的话3，5年估计都没啥问题。哈哈~
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ONLY I CAN !
9楼2015-03-04 18:31:54
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qiaobethy

铁虫 (初入文坛)
空载体就应该放在-20度下保存的。前几天提质粒最后跑胶，刚开始用的是常温下放置的空载体，条带在一条线，后来换了在-20度下保存的，条带就明显了。
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屈从于现实的温暖
10楼2015-03-10 10:12:51
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