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cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒测序问题

各位大侠好，我构建了一个重组质粒要用来表达的，用T7 promoter 测序，结果不能反应出T7启动子区域的序列，酶切位点Nde1距离T7启动子65 bp左右，请问酶切反应是否会导致距离酶切位点65 bp左右的片段发生突变呢？因为我要保证启动子序列正确，那么是否有必要设计引物测出T7启动子的序列呢？
谢谢大家啦！
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1楼 2013-03-24 21:22:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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cdmmore: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-03-25 10:52:54
gyesang: 金币+1, 鼓励应助交流！ 2013-03-26 04:29:17
测序时靠近引物的序列往往读不出来。酶切一般不会造成序列突变。一般碱基错误是发生在PCR的时候。如果你为了保险起见，想测定启动子序列，需要把测序引物设计到启动子上游30-50nt。
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2楼2013-03-25 05:39:09
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