应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 要表达蛋白，构建重组质粒，好几次不成功
201/2返回列表12下一页
查看: 2172  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

向日21

新虫 (小有名气)

[求助] 要表达蛋白，构建重组质粒，好几次不成功 已有7人参与

要表达蛋白，构建重组质粒，我设计的酶切引物上只有酶切位点6个碱基，无论如何都连不上，是因为与质粒的同源壁太短么？我的片段长两千五百bp。我该怎么设计引物，同源壁要多长？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-12-06 10:18:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:30
楼主的引物没有保护碱基，所以PCR产物没有切开，如果不换引物的话，建议先连T载体

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2016-01-05 07:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 刘氏响声丸 at 2016-01-05 09:00:52
可能像楼上说的引物设计有点问题
再者就是酶切没有切完全，质粒酶切没有完全
还有就是运气和经验了，，
祝好运

保护碱基必须加的吗
赞一下(1人) 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
8楼2016-01-05 09:31:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qinqqjiajia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:53
可以先连到T载体上然后再转到目的载体上，另外加上保护碱基
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2016-01-05 10:46:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

绿枫隽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
你的片段不长，应该问题不大，可能原因有几个：第一，酶切位点前一般需要设置保护碱基，第二，你做酶切反应时，没有切开，第三，连接效率不高，第四，你的切好的载体有问题，第五，酶切时时间太长，片段切碎了。供参考

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2015-12-06 10:22:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

向日21

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 绿枫隽 at 2015-12-06 10:22:19
你的片段不长，应该问题不大，可能原因有几个：第一，酶切位点前一般需要设置保护碱基，第二，你做酶切反应时，没有切开，第三，连接效率不高，第四，你的切好的载体有问题，第五，酶切时时间太长，片段切碎了。供参 ...

我还想再问一下，质粒的浓度要达到多少连接效率会好一点，我之前做的只有10ng/ul

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-06 10:39:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:25:20
我也是，切好了载体和片段，连了两次都连不上，不知道问题出在哪里
赞一下 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
4楼2016-01-04 22:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chun.shui

金虫 (正式写手)
加油

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
6楼2016-01-05 07:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)
★
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:26:02
可能像楼上说的引物设计有点问题
再者就是酶切没有切完全，质粒酶切没有完全
还有就是运气和经验了，，
祝好运

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-05 09:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-01-05 09:31:06
保护碱基必须加的吗...

加了保护碱基对切割效率有帮助吧，你可以搜一下各酶切保护碱基的长度和酶切效率

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
10楼2016-01-05 16:52:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 向日21 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +5 tcxiaoxx 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:35 by laoshidan
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭