| 查看: 2069 | 回复: 19 | ||
[求助]
要表达蛋白，构建重组质粒，好几次不成功 已有7人参与
|
||
|
要表达蛋白，构建重组质粒，我设计的酶切引物上只有酶切位点6个碱基，无论如何都连不上，是因为与质粒的同源壁太短么？我的片段长两千五百bp。我该怎么设计引物，同源壁要多长？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有71人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关pPICZA、pPIC9K酵母表达质粒如何正确构建载体表达蛋白
已经有6人回复
- 看到的一篇有关重组蛋白的纯化方法的文章，还有案例介绍说的！！
已经有2人回复
- 评审意见，唉
已经有88人回复
- 关于真核生物表达系统的一些问题
已经有10人回复
- 帮忙毕业翻译！！！万分感谢，自己英语不好！
已经有4人回复
- 关于重组菌蛋白表达后镍柱纯化脱盐后的一个问题
已经有8人回复
- 崩溃！！易错pcr重组质粒构建总是失败！！求大神指导！
已经有8人回复
- 质粒DNA的分离、纯化和鉴定
已经有32人回复
- 如何在丝状真菌中表达如何蛋白
已经有3人回复
- 构建重组载体
已经有4人回复
- promeg体外翻译系统：如何构建EGFP和特定基因的重组质粒
已经有1人回复
- 请问建立竞争ELISA（competitive ELISA）方法需要使用多少纯话的标准蛋白？
已经有6人回复
- 两种重组质粒的重新构建问题
已经有1人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 多个亚基蛋白 ORF串联表达
已经有9人回复
- 用于表达的重组载体构建后需要测序吗？
已经有6人回复
- 【资料】续：众多生物信息学数据库，总有你需要的，
已经有23人回复
xl0071334
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 11335.4
- 红花: 7
- 帖子: 2717
- 在线: 315.8小时
- 虫号: 1057964
- 注册: 2010-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:30
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:30
|
楼主的引物没有保护碱基，所以PCR产物没有切开，如果不换引物的话，建议先连T载体 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-01-05 07:09:49
曼陀罗的祈祷
金虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1282.3
- 散金: 50
- 红花: 7
- 帖子: 494
- 在线: 187.2小时
- 虫号: 2660284
- 注册: 2013-09-13
- 性别: MM
- 专业: 水产学
8楼2016-01-05 09:31:06
9楼2016-01-05 10:46:18
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
感谢参与，应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
|
你的片段不长，应该问题不大，可能原因有几个：第一，酶切位点前一般需要设置保护碱基，第二，你做酶切反应时，没有切开，第三，连接效率不高，第四，你的切好的载体有问题，第五，酶切时时间太长，片段切碎了。供参考 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2015-12-06 10:22:19
3楼2015-12-06 10:39:46
曼陀罗的祈祷
金虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1282.3
- 散金: 50
- 红花: 7
- 帖子: 494
- 在线: 187.2小时
- 虫号: 2660284
- 注册: 2013-09-13
- 性别: MM
- 专业: 水产学
4楼2016-01-04 22:41:51
chun.shui
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3060.4
- 散金: 737
- 帖子: 488
- 在线: 98.6小时
- 虫号: 4226367
- 注册: 2015-11-17
- 专业: 生物大分子结构与功能
6楼2016-01-05 07:10:19
7楼2016-01-05 09:00:52
10楼2016-01-05 16:52:00