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要表达蛋白，构建重组质粒，好几次不成功 已有7人参与
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要表达蛋白，构建重组质粒，我设计的酶切引物上只有酶切位点6个碱基，无论如何都连不上，是因为与质粒的同源壁太短么？我的片段长两千五百bp。我该怎么设计引物，同源壁要多长？ 发自小木虫IOS客户端 |
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3楼2015-12-06 10:39:46
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
感谢参与，应助指数 +1
向日21(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:04
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你的片段不长，应该问题不大，可能原因有几个：第一，酶切位点前一般需要设置保护碱基，第二，你做酶切反应时，没有切开，第三，连接效率不高，第四，你的切好的载体有问题，第五，酶切时时间太长，片段切碎了。供参考 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2015-12-06 10:22:19
曼陀罗的祈祷
金虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 1282.3
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- 红花: 7
- 帖子: 494
- 在线: 187.2小时
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- 性别: MM
- 专业: 水产学
4楼2016-01-04 22:41:51
xl0071334
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 11335.4
- 红花: 7
- 帖子: 2717
- 在线: 315.8小时
- 虫号: 1057964
- 注册: 2010-07-15
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
★
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:30
向日21(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:25:30
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楼主的引物没有保护碱基，所以PCR产物没有切开，如果不换引物的话，建议先连T载体 发自小木虫Android客户端 |
5楼2016-01-05 07:09:49
40