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luyandaoye11

新虫 (初入文坛)

[求助] promeg体外翻译系统:如何构建EGFP和特定基因的重组质粒

如题目:我们要直接用promeg体外翻译系统(TNT快速翻译系统)表达出细胞内全长蛋白PAR,其N端加了EGFP。所以我们只需要提供EGFP和PAR的重组质粒,既然要用真核表达系统,那么,选用什么质粒?酶切位点?如何融合EGFP和PAR?如何检测试验是否成功?和一般基因工程的连接子的构建需要多的是什么?如果觉得我的问题太多太基础的话,有没有相关的书籍可以阅读得知的。第一次做科研,遇到这么具体的问题,头有点大啊。各位大神路过请指点一二万分感激~
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zhouking8758

木虫 (正式写手)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-03 21:14:22
体外翻译系统的说明书会告诉你选用什么样的质粒。
另外重组质粒的构建是最基础的实验技能,请请教实验室的师兄师姐,或者参考《分子克隆》。
融合EGFP和PAR可以通过重叠PCR或者两步酶切酶连克隆得到(这个过程中注意不要移码)。
克隆鉴定的方法有PCR法、酶切鉴定以及测序法等方法。
2楼2013-07-03 21:11:58
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