24小时热门版块排行榜    

查看: 617  |  回复: 1

luyandaoye11

新虫 (初入文坛)

[求助] promeg体外翻译系统:如何构建EGFP和特定基因的重组质粒

如题目:我们要直接用promeg体外翻译系统(TNT快速翻译系统)表达出细胞内全长蛋白PAR,其N端加了EGFP。所以我们只需要提供EGFP和PAR的重组质粒,既然要用真核表达系统,那么,选用什么质粒?酶切位点?如何融合EGFP和PAR?如何检测试验是否成功?和一般基因工程的连接子的构建需要多的是什么?如果觉得我的问题太多太基础的话,有没有相关的书籍可以阅读得知的。第一次做科研,遇到这么具体的问题,头有点大啊。各位大神路过请指点一二万分感激~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouking8758

木虫 (正式写手)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-03 21:14:22
体外翻译系统的说明书会告诉你选用什么样的质粒。
另外重组质粒的构建是最基础的实验技能,请请教实验室的师兄师姐,或者参考《分子克隆》。
融合EGFP和PAR可以通过重叠PCR或者两步酶切酶连克隆得到(这个过程中注意不要移码)。
克隆鉴定的方法有PCR法、酶切鉴定以及测序法等方法。
2楼2013-07-03 21:11:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 luyandaoye11 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 15/750 2026-03-21 10:16 by 脱颖而出
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
信息提示
请填处理意见