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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » promeg体外翻译系统：如何构建EGFP和特定基因的重组质粒
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luyandaoye11

新虫 (初入文坛)

[求助] promeg体外翻译系统：如何构建EGFP和特定基因的重组质粒

如题目：我们要直接用promeg体外翻译系统（TNT快速翻译系统）表达出细胞内全长蛋白PAR，其N端加了EGFP。所以我们只需要提供ＥGFP和PAR的重组质粒，既然要用真核表达系统，那么，选用什么质粒？酶切位点？如何融合ＥGFP和PAR？如何检测试验是否成功？和一般基因工程的连接子的构建需要多的是什么？如果觉得我的问题太多太基础的话，有没有相关的书籍可以阅读得知的。第一次做科研，遇到这么具体的问题，头有点大啊。各位大神路过请指点一二万分感激~
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1楼 2013-07-03 20:56:28
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zhouking8758

木虫 (正式写手)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-03 21:14:22
体外翻译系统的说明书会告诉你选用什么样的质粒。
另外重组质粒的构建是最基础的实验技能，请请教实验室的师兄师姐，或者参考《分子克隆》。
融合EGFP和PAR可以通过重叠PCR或者两步酶切酶连克隆得到（这个过程中注意不要移码）。
克隆鉴定的方法有PCR法、酶切鉴定以及测序法等方法。
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2楼2013-07-03 21:11:58
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